鈣離子阻滯劑對(duì)2型糖尿病大鼠腎臟細(xì)胞凋亡及調(diào)控基因Bcl—2，Bax的影響.pdf

1、本文探討了鈣離子阻滯劑(CCB)——苯磺酸氨氯地平對(duì)2型糖尿病大鼠腎臟細(xì)胞凋亡及調(diào)控基因Bax，Bcl-2的影響，以探討CCB防治糖尿病腎病的作用機(jī)制。 研究方法：制造了2型糖尿病大鼠模型，觀察苯磺酸氨氯地平對(duì)糖尿病大鼠腎臟保護(hù)作用及其對(duì)細(xì)胞凋亡與凋亡相關(guān)基因Bcl-2和Bax的影響，以探討苯磺酸氨氯地平防治糖尿病腎病的作用機(jī)制。本實(shí)驗(yàn)采用河北醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心的提供清潔級(jí)健康SD雄性大鼠42只，分為正常對(duì)照組12只，(A組，

2、簡(jiǎn)稱對(duì)照組)喂以普通飼料，實(shí)驗(yàn)組30只喂以高脂高糖飲食，12W后腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)30mg/kg，注射STZ2W后空腹血糖≥16.67mmol/L共24只入選，進(jìn)一步隨機(jī)分為2型糖尿病組12只(B組，簡(jiǎn)稱糖尿病組)與2型糖尿病氨氯地平治療組12只(C組，簡(jiǎn)稱治療組)。造模成功后C組給予氨氯地平(1mg/kg.d)灌胃治療，A組與B組僅給予等量的生理鹽水灌胃。每周稱體重和測(cè)血糖一次。實(shí)驗(yàn)期間B組與C組始終保持血糖濃度不低于16.

3、67mmol/L。分別于實(shí)驗(yàn)8W和12W后各組取6只大鼠，觀察腎重、體重，計(jì)算肥大指數(shù)(腎重/體重)、測(cè)血糖、24小時(shí)尿白蛋白和血脂等生化指標(biāo)；光鏡下觀察各組腎小球內(nèi)細(xì)胞外基質(zhì)蓄積、基底膜增厚及系膜細(xì)胞增生及腎小管的病變情況；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)大鼠腎組織細(xì)胞凋亡并計(jì)算凋亡指數(shù)；免疫組織化學(xué)方法(SP法)檢測(cè)各組大鼠腎組織Bcl-2以及Bax基因表達(dá)。 研究結(jié)果： 1.癥狀，體征：實(shí)驗(yàn)組大鼠在注射STZ后1-2天即出現(xiàn)多尿，多

4、飲，多食癥狀，注射STZ后2W后即開始實(shí)驗(yàn)時(shí)，癥狀已明顯，隨病程的延長(zhǎng)，上述癥狀更加顯著，但是在整個(gè)病程變化中體重下降不明顯。治療組在癥狀和體征上與同期糖尿糖尿病組相似。 2.生化檢查顯示：在實(shí)驗(yàn)8W后，糖尿病組大鼠空腹血糖(FBG)，胰島素(Ins)、甘油三酯(TG)、24小時(shí)尿白蛋白排泄率(Uaer)等均較對(duì)照組顯著增加(P＜0.05)，肌酐清除率(Ccr)降低，且隨著病程的延長(zhǎng)進(jìn)行性加重，到12W糖尿病組大鼠Ins、TG、

5、Uaer較8W時(shí)明顯增高，膽固醇(TC)水平也上升。FBG則一直維持在較高水平，12W比8W變化不明顯。治療組較同期糖尿病組大鼠TBG、TG、Ccr有所下降，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；Ins、TC水平明顯降低，Uaer明顯好轉(zhuǎn)。糖尿病組大鼠腎小管損傷指數(shù)與TC、TG、Uaer呈明顯的正相關(guān)；與Ccr呈明顯的負(fù)相關(guān)。治療組大鼠腎重/體重(肥大指數(shù))高于對(duì)照兩組、低于糖尿病組，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；治療組大鼠低于糖尿病組，有顯著差異(P＜0.

6、05)。 3.病理改變：光鏡下觀察，糖尿病組大鼠實(shí)驗(yàn)8W后與同期對(duì)照組相比，腎小球體積增大，系膜基質(zhì)增多，部分腎小管發(fā)生空泡變性。B、C組比較上述變化差別不明顯；實(shí)驗(yàn)12W后，除上述改變外，糖尿病組還可見部分腎小管萎縮、部分?jǐn)U張明顯，上皮細(xì)胞水腫及破碎的程度加深，脂肪空泡增多、變大，受損的區(qū)域也明顯增多，管腔內(nèi)可見脫落的細(xì)胞，透明管型形成，部分腎小管基底膜不規(guī)則增厚，胞漿內(nèi)可見紫紅色糖原顆粒增多(PAS染色)，腎小球系膜基質(zhì)進(jìn)一

7、步增寬，基底膜增厚，纖維組織(Fig)增生。CCB治療的C組與B組比較，上述變化較輕。 4.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示：糖尿病組大鼠腎小球及腎小管凋亡率高于其他各組，治療組腎小球及腎小管凋亡率與糖尿病組比較降低，有顯著差異。 5.免疫組織化學(xué)方法(SP法)檢測(cè)結(jié)果顯示：Bcl-2與Bax基因在各組均有不同程度表達(dá)，糖尿病組Bcl-2與Bax表達(dá)增強(qiáng)，治療組與糖尿病組比較，Bcl-2表達(dá)增強(qiáng)，Bax表達(dá)減弱。 研究結(jié)論

8、： 1.2型糖尿病大鼠腎臟病變表現(xiàn)為尿蛋白增加，肥大指數(shù)增大，腎小球系膜細(xì)胞增生，基底膜增厚及細(xì)胞外基質(zhì)堆積。 2.糖尿病腎病時(shí)腎臟細(xì)胞凋亡增加，而Bcl-2/Bax表達(dá)比值降低。細(xì)胞凋亡及相關(guān)基因Bcl-2/Bax參與了糖尿病腎病的發(fā)病。 3.CCB氨氯地平可降低2型糖尿病大鼠尿蛋白與減輕腎臟肥大，且獨(dú)立于降低血糖與血壓作用。 4.CCB使Bax基因表達(dá)下降、Bcl-2基因表達(dá)增加；CCB通過(guò)影響B(tài)cl