雌激素對EAE大鼠細胞凋亡及調(diào)控基因Bcl-2、Bax的影響.pdf

1、目的：建立Wistar大鼠去卵巢后實驗性自身免疫性腦脊髓炎(experimentalautoimmuneencephalomyelitis，EAE)動物模型，觀察雌二醇(estradiol，E2)對EAE的治療效果，及其對EAE中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥浸潤細胞凋亡及凋亡相關蛋白Bcl-2、Bax的影響，為臨床應用E2治療多發(fā)性硬化(mltiplesclerosis，MS)提供實驗依據(jù)。 方法：1.四肢足掌皮內(nèi)注射完全福氏佐劑-豚鼠全脊髓

2、勻漿(CFA-GPSCH)，并輔以注射百日咳疫苗，誘導去卵巢Wistar大鼠建立EAE模型。將去卵巢雌性Wistar大鼠隨機分為對照組、EAE組和E2治療組，免疫后第0天E2治療組肌肉注射E2500μg/kg·d，對照組及EAE組給予等體積的花生油注射，免疫后第20天停止注射。觀察各組的發(fā)病情況至30天。放射免疫法測血清E2濃度。2.發(fā)病后三天處死動物，用HE染色觀察中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥細胞浸潤程度，用3'末端脫氧核糖核苷酸轉(zhuǎn)移酶(TdT)

3、介導的dUTP缺口末端標記(TUNEL)法檢測其細胞凋亡情況。免疫組化檢測浸潤細胞Bcl-2、Bax蛋白的表達。放射免疫法測血清E2濃度。 結(jié)果：1.對照組未見發(fā)病，體重增高最高值10.12±1.28。EAE組發(fā)病率為83.3％，潛伏期12.10±0.99天，癥狀持續(xù)時間14.00±1.15，臨床評分最高值3.10±0.99，體重降低最高值28.50±1.85：E2治療組發(fā)病率為33.3％，潛伏期為15.50±1.29，癥狀持續(xù)

4、時間12.00±0.82，臨床評分最高1.50±0.58，體重降低最高值22.68±1.53。與EAE組相比，E2治療組發(fā)病率、潛伏期、癥狀持續(xù)時間、臨床評分最高值、體重降低最高值差別均有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。對照組血清E2濃度為11.53±2.87pmol/l，EAE組血清E2濃度為10.62±1.35pmol/l，E2治療組血清E2濃度為78.25±0.46pmol/l，對照組和EAE組血清E2濃度差別無統(tǒng)計學意義(p>0.0

5、5)，E2治療組與對照組、EAE組血清E2濃度比較有顯著統(tǒng)計學意義(p<0.01)。2.對照組大鼠未見明顯異常病理改變。EAE組血管周圍炎癥浸潤細胞數(shù)為70.19±20.79，凋亡細胞數(shù)為5.26±4.43，凋亡率6.97％；E2治療組血管周圍炎癥浸潤細胞數(shù)為42.35±24.38，凋亡細胞數(shù)為6.08±3.50，凋亡率13.34％，兩組相比差異有明顯統(tǒng)計學意義(p<0.05)。EAE組每個浸潤細胞Bcl-2的積分光密度為49.29±1

6、8.23，Bax的積分光密度為25.38±17.85，Bcl-2/Bax為2.28±0.65；E2治療組每個浸潤細胞Bcl-2的積分光密度為30.33±16.75，Bax的積分光密度為26.75±14.41，Bcl-2/Bax為1.24±0.13，兩組相比，每個浸潤細胞Bcl-2的積分光密度差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)，Bax的積分光密度差異無統(tǒng)計學意義(p>0.05)，Bcl-2/Bax差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。EAE組血