喉咽癌細(xì)胞5-氟尿嘧啶耐藥篩選前后P-170、LRP、TOPOⅡ的表達(dá)及意義.pdf

1、目的：建立人喉咽癌Hep-2/5-Fu多藥耐藥細(xì)胞株，以進(jìn)一步研究喉口岡部腫瘤MDR的機(jī)制。 方法：采用體外藥物濃度梯度遞增的誘導(dǎo)方法建立5-Fu獲得Hep-2/5-Fu多藥耐藥細(xì)胞株。采用MTT法檢測(cè)Hep-2細(xì)胞和Hep-2/5-Fu耐藥細(xì)胞株的IC50，并計(jì)算其耐藥指數(shù)。觀察其細(xì)胞形態(tài)學(xué)、生長(zhǎng)曲線、倍增時(shí)間。細(xì)胞免疫組化、逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)方法檢測(cè)P糖蛋白(P-170)、肺耐藥相關(guān)蛋白(LRP)、拓?fù)洚?/p>

2、構(gòu)酶II(TopoII)及其mRNA在Hep-2和Hep-2/5-Fu細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)。 結(jié)果：親本細(xì)胞Hep-2經(jīng)5-Fu耐藥篩選2個(gè)月后成功建立人喉咽癌Hep-2/5-Fu多藥耐藥細(xì)胞株模型。體外培養(yǎng)見細(xì)胞趨向群集性生長(zhǎng)，耐藥細(xì)胞株倍增時(shí)間較親本細(xì)胞株長(zhǎng)。由MTT法測(cè)得其5-Fu的IC50為由篩選前的2ug/ml上升到約60ug/ml。免疫組化和RT-PCR檢測(cè)耐藥細(xì)胞P-170、LRP表達(dá)量較親本細(xì)胞明顯增強(qiáng)，而耐藥細(xì)胞Top