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文檔簡介
1、目的: 化療藥物的毒副作用大和易引起耐藥等棘手問題是胃癌復(fù)發(fā)和治療失敗的最主要原因之一,因此解決耐藥問題和優(yōu)化化療方案顯得尤為必要。二十二碳六烯酸能選擇性殺傷腫瘤細(xì)胞,具有抑制癌細(xì)胞增殖、糾正細(xì)胞周期功能紊亂、誘導(dǎo)凋亡等作用,但對其確切的抑癌機(jī)制目前還不十分清楚。本研究擬評估DHA聯(lián)合5-氟尿嘧啶對胃癌SGC7901細(xì)胞生長抑制作用;用敏感度和特異性高的Annexin-V/PI證實(shí)DHA聯(lián)合5-FU對誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞凋亡更明顯;并對凋亡相關(guān)
2、基因表達(dá)半定量分析,初步探討DHA與5-FU聯(lián)合可增強(qiáng)抑瘤、凋亡效應(yīng)的作用機(jī)制。
方法:
1.臺盼藍(lán)拒染檢測DHA、5-FU兩藥單用和聯(lián)用對細(xì)胞活力的影響,聯(lián)合系數(shù)判斷兩藥合用效果;
2.光學(xué)、倒置顯微鏡下觀察兩藥作用SGC7901細(xì)胞后生長狀況;
3.PI染色流式細(xì)胞術(shù)檢測亞二倍體峰比并擬合細(xì)胞周期曲線;
4.Annexin-V/PI雙標(biāo)記檢測早期凋亡;
3、 5.RT-PCR方法檢測fas、bcl-2、bcl2l12、bim、bax、caspase-9和caspase-3基因表達(dá)。
結(jié)果: DHA可抑制SGC7901細(xì)胞生長,且呈劑量和時間依賴性(P<0.05), 24、48小時的半數(shù)抑制濃度分別為67.81、45.76μg/ml;低濃度DHA聯(lián)合不同濃度5-FU作用24小時后細(xì)胞抑制率較5-FU單藥明顯提高;DHA聯(lián)合5-FU對細(xì)胞生長的抑制具有協(xié)同作用(CI<1,P<0
4、.01);倒置顯微鏡下可見兩藥聯(lián)合處理后細(xì)胞稀疏;亞二倍體峰比、Annexin-V早期凋亡率示DHA、5-FU均能誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡且聯(lián)合后凋亡更明顯;擬合的細(xì)胞周期曲線聯(lián)合組細(xì)胞被明顯阻滯于G0/G1和G2/M期(P<0.01);RT-PCR顯示DHA下調(diào)fas、bcl-2、bcl2l12 和caspase-9表達(dá),上調(diào)bax表達(dá),兩藥聯(lián)合表達(dá)變化更顯著。
結(jié)論: DHA可抑制胃癌SGC7901細(xì)胞增殖;DHA聯(lián)合5-FU后對
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