氧誘導(dǎo)模型鼠視網(wǎng)膜新生血管中VEGF及AQP4表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　1、建立小鼠氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病變模型，通過高氧環(huán)境誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生視網(wǎng)膜新生血管，模擬人類早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變。
　　2、研究氧誘導(dǎo)模型鼠視網(wǎng)膜新生血管組織中VEGF及AQP4表達(dá)的變化。
　　3、探討VEGF及AQP4在氧誘導(dǎo)模型鼠視網(wǎng)膜新生血管中的作用機(jī)制及意義。
　　方法：
　　1、將7日齡的健康C57/BL6J小鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組高氧誘導(dǎo)建立小鼠氧誘導(dǎo)視網(wǎng)膜病變模型，對(duì)照組置于正?？諝?/p>

2、環(huán)境下飼養(yǎng)。對(duì)照組于出生后17日，實(shí)驗(yàn)組于出生后14、17、21、26日處死取材。
　　2、做HE染色觀察視網(wǎng)膜新生血管。
　　3、免疫組化觀察VEGF及AQP4的表達(dá)。
　　4、行westernblot檢測VEGF及AQP4蛋白。
　　5、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)進(jìn)行分析，所有數(shù)據(jù)資料均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

3、的標(biāo)準(zhǔn)。
　　結(jié)果：
　　1、視網(wǎng)膜新生血管的觀察:
　　正常組各時(shí)間點(diǎn)的視網(wǎng)膜組織切片中，未發(fā)現(xiàn)或僅在少數(shù)切片中偶見突破內(nèi)界膜的血管內(nèi)皮細(xì)胞核。高氧組14d時(shí)可見少量內(nèi)界膜外的細(xì)胞核，17d、21d時(shí)可見大量突破內(nèi)界膜的新生血管管腔，26d時(shí)突破進(jìn)玻璃體內(nèi)的細(xì)胞核數(shù)量出現(xiàn)下降。各組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2、VEGF在各組表達(dá)的變化:
　　免疫組化染色結(jié)果顯示，正常視網(wǎng)膜中VEGF呈陽性表達(dá)。在高氧組17

4、d、21d時(shí)增強(qiáng)明顯。以平均灰度值為指標(biāo)對(duì)比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　Westernblot檢測結(jié)果顯示，VEGF在各組視網(wǎng)膜組織中均有表達(dá)，在對(duì)照組中的呈陽性表達(dá)，在14d時(shí)表達(dá)開始輕微上調(diào)，17d和21d時(shí)表達(dá)顯著上升，26d時(shí)VEGF的表達(dá)發(fā)生下降。統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示各組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3、AQP4在各組表達(dá)的變化:
　　免疫組化染色結(jié)果顯示，正常視網(wǎng)膜中AQP4呈陽性表達(dá)。高氧組14d、17d、2

5、1d時(shí)AQP4呈強(qiáng)陽性表達(dá)，以平均灰度值為指標(biāo)對(duì)比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　Westernblot檢測結(jié)果顯示，AQP4在正常視網(wǎng)膜中能夠表達(dá)，在高氧組鼠視網(wǎng)膜中的表達(dá)隨時(shí)間發(fā)生變化。14d時(shí)表達(dá)開始增強(qiáng)。17d時(shí)表達(dá)水平達(dá)到高峰，明顯高于正常組。21d、26d時(shí)AQP4蛋白表達(dá)水平有所下降，但仍高于正常組。統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示各組之間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　VEGF和AQP4在氧誘導(dǎo)模型鼠視網(wǎng)膜組織中的表