細胞色素P450 2E1在脂肪性肝病中的致病作用.pdf

1、近年來脂肪性肝病(fatty liver disease，F(xiàn)LD)患病率呈逐年增高趨勢，其防治也逐漸受到重視，但FLD發(fā)病機制復(fù)雜，迄今仍不明確。細胞色素P450 2E1是微粒體氧化酶系統(tǒng)中主要代謝酶之一，在肝臟對內(nèi)、外源性物質(zhì)的代謝中起重要作用。研究發(fā)現(xiàn)脂肪肝時，細胞色素P450 2E1表達增強，在肝臟內(nèi)和脂肪變的程度、分布相一致，提示CYP2E1參與了脂肪肝的形成。但FLD進一步發(fā)展至脂肪性肝炎、纖維化時CYP2E1的表達狀況，及相

2、關(guān)機制性的研究，目前國內(nèi)外尚未見報道。 目的： 本實驗旨在研究 (1)酒精和高脂飲食兩大脂肪性肝病病因單獨和聯(lián)合對CYP2E1表達影響 (2)CYP 2E1與肝細胞脂肪變、炎癥壞死的關(guān)系，探討可能的機制。為脂肪性肝病發(fā)病機制進一步的完善奠定實驗基礎(chǔ)。 方法： 46只雄性Wistar大鼠按體重層次隨機分為4組建立模型：酒精組(A)，高脂飲食組(F)，酒精加高脂飲組(FA)，對照組(N)。A組

3、用30％-50％的酒精(v/v)灌胃，逐漸加大酒精濃度，10ml/kg，bid；F組高脂飲食為：2％膽固醇加10％豬油加88％的普通飼料；FA組為兩者的疊加。12、16周隨機抽取實驗組大鼠各一只，行組織切片鏡下分別顯示脂肪肝和輕度炎癥纖維化。16周末股動脈放血處死全部大鼠，檢測所需指標：生化法測定血清ALT，AST，F(xiàn)FA，TG，CHO，HE染色肝組織。免疫組化法及RT-PCR測CYP 2E1和mRNA的表達；肝勻漿生物化學(xué)測定MDA、

4、SOD、GSH。組內(nèi)CYP 2E1表達，與肝臟脂肪變、炎癥程度、抗氧化和脂質(zhì)過氧化指標之間進行相關(guān)性檢驗，各指標組間進行方差分析，兩兩比較和析因分析檢驗。 結(jié)果： 1．大鼠體重及肝臟指數(shù)變化： F組大鼠體重明顯高于其他各組(P<0.05)，A、N、FA三組比較差異無顯著性P>0.05。肝指數(shù)比較，各實驗組均比N組不同程度的升高(P<0.05)，以FA組最高，其次是F組、A組，而F組和A組間差異無顯著性(P>0.0

5、5)。 2．肝臟組織學(xué)改變： H-E染色顯示，N組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)完整，肝細胞呈多邊形圍繞中央靜脈呈放射狀，肝竇清晰可見，肝小葉匯管區(qū)基本結(jié)構(gòu)清晰可見。實驗組大鼠肝臟輕至中重度脂肪變，伴肝細胞氣球樣變，點灶狀壞死，匯管區(qū)輕至中度炎細胞浸潤，其中以FA和F脂肪變最嚴重，F(xiàn)A組炎癥壞死最重和其他各組相比P<0.05，可以看到匯管區(qū)輕度纖維化。 3．各組血清生化指標的變化： 實驗組．ALT、AST均比N組高，且差

6、別有顯著性意義(P<0.05)，以FA組最高，其次是F組和A組，但F組和A組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，其余各組比較差異均有顯著性。 4．各組血脂及血清游離脂肪酸的結(jié)果： 實驗組大鼠體內(nèi)血脂均有不同程度的升高，F(xiàn)A組升高最顯著，其次是F組、A組。 5．各組肝組織勻漿抗氧化指標測定結(jié)果： GSH、SOD在實驗組均有不同程度的降低，以FA組最為明顯，其次是F組和A組，但是F組和A組間差別無統(tǒng)計學(xué)意義

7、；MDA中實驗組均有不同程度的升高，以FA組最為明顯，其次是A組、F組，但是F組與A組間無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。 6．肝組織內(nèi)CYP 2E1的表達： 實驗組肝組織內(nèi)CYP 2E1表達明顯增加，且分布呈一定規(guī)律性，多集中在肝腺胞3區(qū)，門靜脈周圍并向2、1區(qū)擴展。在脂肪變、炎癥重的肝組織內(nèi)表達增強，F(xiàn)A組CYP 2E1表達最強(P<0.01)，其次是F組和A組。在正常組織內(nèi)CYP2E1輕度表達，集中在肝腺胞3區(qū)的2-3

8、個細胞界板內(nèi)。 7．肝組織內(nèi)CYP 2E1 mRNA的表達： CYP2 E1基因的表達，各組兩兩比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，由大到小依次為FA、F、A、N組。 CYP 2E1 mRNA表達的析因分析顯示，加用與不加用酒精(A)對肝臟CYP2E1基因的表達差異有顯著性意義(P=0.00)；加用與不加用高脂飲食(F)對CYP 2E1基因表達有顯著性差異(P=0.00)；F與A交互效應(yīng)顯著(P=0.04)。

9、 8．各組CYP 2E1，MDA、脂肪變程度、炎癥程度相關(guān)性分析實驗組CYP 2E1和MDA呈明顯正相關(guān)(r=0.983，P<0.01)而和GSH、SOD成明顯負相關(guān)(r值分別為-0.833，-0.948，P<0.01)，與脂肪變性程度和炎癥積分成顯著正相關(guān)(r值分別是0.618，0.966，P<0.01)。 結(jié)論： 1．酒精和FFA是肝臟CYP 2E1的誘導(dǎo)劑，誘導(dǎo)機制可能分別在蛋白質(zhì)和DNA水平，兩因素同時作