肝細胞色素P4501A1、2E1、3A1在大鼠NAFL形成中的作用.pdf

1、目的：研究大鼠肝細胞色素P4501A1、2E1、3A1在大鼠NAFL形成中的作用，探討大鼠NAFL的發(fā)生機制，為早期臨床防治NAFL摸索理論基礎。 方法：64只雄性Wister大鼠隨機分為基礎飼料組(C)、高脂飼料組(F)，其中C、F組各含2周、4周、8周和12周4個時相點，每組8只動物。動態(tài)觀察各組：①動物體重、肝濕重變化；②HE染色光鏡觀察肝臟組織病理變化，電鏡觀察肝組織超微結構；③測定肝臟組織甘油三酯(TG)、丙二醛(MD

2、A)、以及血清中TG、游離脂肪酸(FFA)生化指標的含量變化；④酶學測定大鼠肝臟組織CYP4501A1(7-乙氧基異惡唑0-脫乙基酶，EROD)活性；CYP4502E1(苯胺羥化酶，ANH)活性；CYP4503A1(紅霉素N-脫甲基酶，ERD)活性。⑤免疫組化觀察CYP4501A1、2E1、3A1在肝組織中的分布；⑥RT-PCR和Westernblotting分析大鼠肝臟CYP4501A1、2E1、3A1mRNA和蛋白水平。 結

3、果：1、大鼠體重、肝濕重的變化情況：12周F組體重及肝臟濕重明顯高于C組(P＜0.01)；2、HE染色結果顯示F組肝臟在2周即可見脂肪浸潤，4周時出現(xiàn)輕度脂肪肝，8-12周出現(xiàn)中、重度脂肪肝；電鏡下觀察F組12周肝組織顯示：肝細胞胞漿內大量類圓形脂滴沉積，細胞器及胞核被擠至胞漿的一邊，胞漿疏松、水腫；而對照組結構正常；3、肝臟內TG、MDA含量F組2周后明顯高于C組(P＜0.05)，隨時間延長，其含量逐漸增加，以12周時最為顯著(P＜0

4、.01)；血清中FFA、TG變化與肝組織TG、MDA也有類似變化；4、大鼠肝臟組織CYP4501A1(7-乙氧基異惡唑O-脫乙基酶，ETOD)活性、CYP4502E1(苯胺羥化酶，ANH)活性及CYP4503A1(紅霉素N-脫甲基酶，ERD)的活性F組于2周后明顯增強(P＜0.05)，隨時間延長，酶活性以12周時增加最為顯著(P＜0.01)；5、免疫組織化學染色顯示：CYP4501A1在C組肝細胞胞漿內著色，呈黃色細顆粒，散在分布，F(xiàn)組

5、2周，著色較正常加深，F(xiàn)組8、12周著色逐漸加深，陽性細胞數增加，在脂肪變明顯的部位著色深；CYP4502E1、3A1與CYP4501A1染色結果變化趨勢相似；6、Westernblot檢測結果顯示：F組CYP4501A1蛋白的表達，2周后與C組比較即有增加，有顯著性差異(P＜0.05)，隨著時間延長，12周時增加最為明顯(P＜0.01)；CYP4502E1、3A1蛋白的表達與CYP4501A1結果變化規(guī)律相似；7、RT-PCR檢測肝臟

6、CYP4501A1、2E1、3A1mRNA水平顯示：F組CYP4501A1mRNA的水平在2周與C組比較即顯著升高(P＜0.05)，隨著時間延長，在12周顯著高于正常水平(P＜0.01)；CYP4502E1、3A1mRNA的水平與CYP4501A1mRNA的水平變化規(guī)律相似。 結論：非酒精性脂肪肝大鼠，隨著脂肪肝的發(fā)生和程度加重，CYP4501A1、2E1、3A1表達逐漸增強，其介導的酶活性顯著增高，通過影響脂肪酸代謝，啟動脂質