口服抗菌肽Scygonadin對(duì)黑鯛免疫及抗氧化指標(biāo)的影響及胃腸道吸收狀況研究.pdf

1、Scygonadin是近年來從擬穴青蟹精漿中分離獲得的一種新的陰離子抗菌肽，具有抗菌功能。該抗菌肽在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)具有重要的潛在應(yīng)用價(jià)值。本項(xiàng)研究擬以Scygonadin的基因工程表達(dá)產(chǎn)物口服海水養(yǎng)殖魚類黑鯛，觀察該抗菌肽進(jìn)入魚體內(nèi)后對(duì)免疫相關(guān)因子的影響及其消化吸收規(guī)律，為將來科學(xué)應(yīng)用抗菌肽提供理論依據(jù)。主要研究成果如下:
　　1、重組Scygonadin基因工程產(chǎn)物灌胃黑鯛免疫及毒性效應(yīng)分析。
　　本實(shí)驗(yàn)以黑鯛（Sparus

2、macrocephlus）為研究對(duì)象，空腹3天后灌胃不同濃度(0.2 mg/mL、0.4 mg/mL、0.8 mg/mL)的Scygonadin各100μL，以PBS為對(duì)照組，采集不同時(shí)間點(diǎn)(6h、12h、24 h、48 h、72 h)的血清及肝臟、腸道組織樣品，測(cè)定超氧化物歧化酶(SOD)、脂質(zhì)過氧化(MDA)、一氧化氮合酶(NOS)、一氧化氮(NO)、谷胱甘肽(GSH)等抗氧化指標(biāo)。對(duì)高濃度組(0.8mg/mL)，進(jìn)一步檢測(cè)髓過氧化

3、物酶(MPO)、過氧化氫酶(CAT)、溶菌酶等免疫指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明黑鯛灌胃重組Scygonadin基因工程產(chǎn)物對(duì)其免疫及抗氧化指標(biāo)無顯著性影響，表明抗菌肽Scygonadin口服后不會(huì)影響機(jī)體的正常免疫功能，且對(duì)機(jī)體無毒害作用，具有安全性。
　　2、重組Scygonadin基因工程產(chǎn)物單次灌胃黑鯛吸收情況分析。
　　黑鯛單次灌胃抗菌肽Scygonadin(0.8 mg/mL)后，于30 min、60 min、90 min、

4、3h、6h、12h、24 h取血清，肝、腸、胃、鰓、腎組織，提取組織總蛋白，WesternBlot方法檢測(cè)血清及組織中Scygonadin蛋白吸收情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明單次灌胃血清及組織中各時(shí)間點(diǎn)均無法檢測(cè)完整的Scygonadin蛋白吸收，表明Scygonadin可能屬于緩慢吸收型抗菌肽分子。
　　3、重組Scygonadin基因工程產(chǎn)物長(zhǎng)期灌胃黑鯛吸收情況分析。
　　在單次灌胃的基礎(chǔ)上進(jìn)一步開展長(zhǎng)期灌胃實(shí)驗(yàn)，每天每尾魚灌胃0

5、.8 mg/mLScygonadin，取連續(xù)灌胃3天及7天血清及組織樣品，提取組織總蛋白，WesternBlot方法檢測(cè)血清及組織中Scygonadin蛋白吸收情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明在連續(xù)灌胃3天后鰓和肝中檢測(cè)到完整Scygonadin吸收，而在連續(xù)灌胃7天后的組織中不能檢測(cè)到完整的Scygonadin。初步實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明抗菌肽Scygonadin可以完整的通過腸道黏膜屏障從而被機(jī)體吸收，并預(yù)示Scygonadin口服后在體內(nèi)存在的時(shí)間可能少

6、于7天。
　　4、重組Scygonadin基因工程產(chǎn)物對(duì)黑鯛頭腎巨噬細(xì)胞功能影響研究。
　　用0.08 mg/mL和0.8 mg/mL抗菌肽Scygonadin與黑鯛頭腎原代巨噬細(xì)胞共同孵育2h，表征細(xì)胞中活性氧含量的細(xì)胞熒光亮度與對(duì)照組相比均無顯著性差異，實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明Scygonadin并不刺激黑鯛頭腎巨噬細(xì)胞活性氧的增加，在細(xì)胞水平上證明了Scygonadin在實(shí)際生產(chǎn)中應(yīng)用的安全性。
　　該項(xiàng)研究初步結(jié)果表明，口