2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:
  茶多酚為茶葉中的多酚類(lèi)物質(zhì),其主要活性成分有EGCG、ECG、EC,具有良好的藥理活性,但因生物利用度低麗影響藥物療效的發(fā)揮。本課題擬研究胃腸道主要生理因素對(duì)茶多酚穩(wěn)定性的影響,并模擬其在胃腸道的消化吸收過(guò)程,以期找到影響茶多酚生物利用度的胃腸道因素,繼而探討提高茶多酚生物利用度的策略。此外,對(duì)茶多酚影響外排轉(zhuǎn)運(yùn)體P-gp及其機(jī)制進(jìn)行了初步探索,為進(jìn)一步研究茶多酚的相互作用奠定基礎(chǔ)。
  方法:
  1.采

2、用HPLC法檢測(cè)pH、時(shí)間、胃蛋白酶、胰酶、膽鹽、腸道菌群等胃腸道生理因素對(duì)茶多酚中主要成分EGCG、ECG、EC的影響。
  2.建立Caco-2細(xì)胞模型,采用電阻儀測(cè)量Caco-2細(xì)胞單層的跨膜電阻TEER值、透射電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)、多功能酶標(biāo)儀檢測(cè)陽(yáng)性對(duì)照藥熒光黃的表觀滲透系數(shù),以對(duì)Caco-2細(xì)胞模型進(jìn)行評(píng)價(jià);采用CCK-8試驗(yàn)考察茶多酚、配藥溶劑及樣品對(duì)Caco-2細(xì)胞的毒性;結(jié)合體外消化模型與Caco-2細(xì)胞模型,模擬茶

3、多酚在胃腸道的消化吸收過(guò)程;采用液質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)茶多酚的含量,以表觀滲透系數(shù)(Papp)為指標(biāo),系統(tǒng)分析茶多酚在胃腸道的消化吸收過(guò)程。
  3.采用羅丹明123外排實(shí)驗(yàn)確定Caco-2細(xì)胞中外排轉(zhuǎn)運(yùn)體P-gp的活性;熒光定量PCR法檢測(cè)茶多酚給藥濃度和作用時(shí)間對(duì)P-gp的基因MDR1表達(dá)水平的影響;
  4.WESTERN BLOT法檢測(cè)茶多酚給藥濃度和作用時(shí)間對(duì)P-gp及NF-κB表達(dá)水平的影響。
  結(jié)果:
  

4、1.pH為1.2-5.8時(shí),pH對(duì)茶多酚的影響不大。但pH為5.8-8.0時(shí),隨著pH的升高,作用時(shí)間的延長(zhǎng),茶多酚穩(wěn)定性逐漸下降;胃蛋白酶、胰酶和膽鹽對(duì)茶多酚無(wú)影響;腸道菌群對(duì)茶多酚的影響最大,作用6h后,茶多酚基本被降解;茶多酚中的三種主要活性成分的穩(wěn)定性為EC>ECG>EGCG。
  2.Caco-2細(xì)胞單層模型培養(yǎng)21天后,電阻TEER值達(dá)到400~600之間;熒光黃的表觀滲透系數(shù)為0.45249×10-6 cm/s<0.

5、5×10-6 cm/s(通透性實(shí)驗(yàn)規(guī)定值);透射電鏡下可觀察到Caco-2細(xì)胞的細(xì)胞連接及微絨毛;隨著茶多酚給藥濃度的升高,Caco-2細(xì)胞存活率先平穩(wěn)后降低。茶多酚濃度為0.25 mg/ml時(shí),Caco-2細(xì)胞的存活率為77.0384%;茶多酚濃度為0.5 mg/ml時(shí),Caco-2細(xì)胞的存活率為17.9872%;配藥溶劑和樣品孵育Caco-2細(xì)胞2h后,Caco-2細(xì)胞的存活率均大于88%,即顯著大于50%;茶多酚的主要活性成分EG

6、CG的RPapp(PappBL-AP/PappAP-BL)即外排率>2;EGCG的表觀滲透系數(shù)很低,加入P-gp的抑制劑維拉帕米后外排率顯著下降;EGCG在堿性溶液中的轉(zhuǎn)運(yùn)量較酸性溶液中的低。
  3.P-gp的抑制劑維拉帕米可顯著抑制P-gp的底物羅丹明123的外排。P-gp的基因MDR1的表達(dá)水平隨茶多酚給藥濃度和給藥時(shí)間的增加而下調(diào)。
  4.P-gp和NF-κ B的表達(dá)水平隨茶多酚給藥濃度和給藥時(shí)間的延長(zhǎng)而下調(diào)。

7、r>  結(jié)論:
  1.茶多酚在酸性條件下很穩(wěn)定,但在堿性溶液中有自動(dòng)氧化的傾向;胃蛋白酶、胰酶和膽鹽對(duì)茶多酚無(wú)影響;腸道菌群可能是通過(guò)產(chǎn)生對(duì)茶多酚有降解作用的酶,從而使茶多酚的穩(wěn)定性降低;EGCG可能是含酯基,且酚羥基較多,穩(wěn)定性比ECG和EC差。
  2.茶多酚的給藥濃度最好控制在0.25 mg/ml以內(nèi),以確保Caco-2細(xì)胞的存活率大于50%,配藥溶劑和樣品對(duì)Caco-2細(xì)胞均無(wú)影響,可排除待測(cè)溶液通過(guò)破壞Caco-

8、2細(xì)胞單層的完整性,使EGCG的表觀滲透系數(shù)偏大的可能;茶多酚的主要成分EGCG的RPapp>2,說(shuō)明EGCG可能受外排轉(zhuǎn)運(yùn)體的轉(zhuǎn)運(yùn)作用。加入P-gp的抑制劑維拉帕米后外排率顯著下降,說(shuō)明EGCG可能是P-gp的底物。
  3.羅丹明外排實(shí)驗(yàn)表明Caco-2細(xì)胞的P-gp功能完好;熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)說(shuō)明茶多酚對(duì)MDR1的表達(dá)具有濃度依賴性及時(shí)間依賴性抑制作用。
  4.WB實(shí)驗(yàn)說(shuō)明茶多酚對(duì)P-gp和NF-κB的表達(dá)具有濃度依

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