辛伐他汀對膿毒癥大鼠內(nèi)皮細(xì)胞功能的保護作用.pdf

1、目的:膿毒癥是機體對感染的一種失控的全身性炎癥反應(yīng)綜合征(SIRS),是嚴(yán)重感染、創(chuàng)傷、燒傷、大手術(shù)后、重型胰腺炎和休克等常見的并發(fā)癥,進一步發(fā)展可導(dǎo)致膿毒癥休克、急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)和多器官功能障礙綜合征(MODS)。近30年膿毒癥的發(fā)病率每年以1.5-8％的比例上升,病死率平均高達40％,是危重癥患者死亡的主要原因。目前對膿毒癥的治療沒有突破性進展,原因是其發(fā)病機制復(fù)雜,涉及炎癥、免疫、凝血及組織損害等一系列問題,并與多系

2、統(tǒng)器官病生理改變密切相關(guān)。其中內(nèi)皮細(xì)胞(EC)占據(jù)著核心地位,它是炎癥級聯(lián)反應(yīng)的調(diào)控者,是宿主對膿毒癥反應(yīng)的重要組成部分,其結(jié)構(gòu)和功能改變可能是膿毒癥發(fā)生、發(fā)展的中心環(huán)節(jié),進而促進特異性位點炎癥反應(yīng)的循環(huán)發(fā)生、凝血系統(tǒng)激活以及細(xì)胞間的相互作用,最終導(dǎo)致微血管內(nèi)血栓形成、低氧血癥和器官功能障礙。因此,EC的活化和損傷與膿毒癥密切相關(guān)。近年來國外研究證明他汀類藥物治療膿毒癥具有抗炎、抗凝、減輕重要臟器損傷等作用并能降低其發(fā)病率及死亡率,成為

3、近年膿毒癥治療研究的熱點,其主要機制之一可能與保護血管內(nèi)皮功能有關(guān)。本研究應(yīng)用盲腸結(jié)扎穿孔(CLP)的方法制作膿毒癥大鼠模型,通過設(shè)立多個時間點觀察膿毒癥時辛伐他汀的內(nèi)皮保護作用機制,以期減少并發(fā)癥、降低死亡率,為膿毒癥的臨床用藥提供理論依據(jù)。
　　 方法:清潔級雌性wistar大鼠80只,體重200-250g(河北醫(yī)科大學(xué)實驗動物學(xué)部)。隨機分為4組,Ⅰ組:健康對照組(8只);Ⅱ組:假手術(shù)組(8只);Ⅲ組:造模組(32只);Ⅳ

4、組:給藥后造模組(32只)。采用CLP法制作大鼠膿毒癥模型,以術(shù)后大鼠出現(xiàn)精神倦怠、腹脹、躁動、寒戰(zhàn)、眼角分泌物增多、毛發(fā)凌亂,處死后見腹腔有血性滲液,盲腸腫脹變黑、粘連,空腸腸管脹氣等表現(xiàn),確定膿毒癥制模成功。其中Ⅳ組造模前采用胃管給藥(辛伐他汀20mg/kg/day),每日一次,連續(xù)2周后行CLP;其他三組同等體積的生理鹽水連續(xù)灌胃2周。Ⅰ組大鼠活殺留取血液及胸主動脈標(biāo)本。Ⅱ組術(shù)后6h留取血液及胸主動脈標(biāo)本。Ⅲ組及Ⅳ組分別于術(shù)后3h

5、、6h、24h及48小時(每個時間點8只)留取血液及胸主動脈標(biāo)本。測組大鼠肛溫及血常規(guī)協(xié)助確立造模成功;觀察死亡情況,計算各組大鼠病死率;用ELISA法檢測血清E-選擇素、血管性血友病因子(vWF);用Western印跡法分析誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)和內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)在膿毒癥過程中蛋白表達的變化。
　　 結(jié)果
　　 1大鼠一般表現(xiàn):Ⅲ組及Ⅳ組大鼠在CLP后2～3h可自由飲水,6～8h出現(xiàn)精神倦怠、腹脹

6、、躁動、寒戰(zhàn)、排稀便、眼角分泌物增多、毛發(fā)凌亂,進食、進水減少,處死后可見腹腔有血性滲液,盲腸腫脹變黑、粘連,空腸腸管脹氣,肺肝等臟器化膿,可聞及惡臭等表現(xiàn)。Ⅱ組大鼠外觀正常、活動如常,腹腔內(nèi)各臟器無明顯病理改變,表面光滑,全部動物均存活。
　　 2白細(xì)胞計數(shù)結(jié)果:Ⅰ組白細(xì)胞計數(shù)(6.78±0.94)×109/L,Ⅱ組稍高于Ⅰ組(P＞0.05);Ⅲ組3h白細(xì)胞數(shù)量(10.43±0.66)×109/L,6h上升到(12.79±0.

7、51)×109/L,后呈下降趨勢,24h白細(xì)胞數(shù)量下降到(8.52±0.40)×109/L,但均高于Ⅰ組和Ⅱ組(P＜0.05),48h下降到(7.45±0.59)×109/L,顯著低于3h、6h組(P＜0.05);Ⅳ組3h白細(xì)胞計數(shù)(8.79±0.70)×109/L,6h為(10.36±0.19)×109/L,與Ⅲ組同時間點比較均有下降(P＜0.05)。
　　 3肛溫結(jié)果:Ⅰ組與Ⅱ組大鼠肛溫結(jié)果比較無差別(P＞0.05);Ⅲ組6

8、h出現(xiàn)肛溫數(shù)值下降(35.1±0.83℃),24h達最低(33.8±1.45℃),但只有24h顯著低于Ⅰ組和Ⅱ組(P＜0.05);Ⅳ組3h肛溫(35.8±0.55℃)低于Ⅲ組3h肛溫(36.4±1.05℃)(P＜0.05)。
　　 4病死率結(jié)果:Ⅲ組及Ⅳ組24h病死率均為50％(P＞0.05);Ⅲ組48h病死率為75％,Ⅳ組為50％,兩組比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);其它組死亡率為0％。
　　 5 E-選擇素檢測結(jié)果

9、:Ⅰ組E-選擇素表達最低,Ⅱ組與Ⅰ組比較稍有增高(P＞0.05);Ⅲ組3h E-選擇素有明顯升高,6h達高峰,24h后呈下降趨勢,并均高于Ⅰ組(P＜0.05)和Ⅱ組;Ⅳ組3h、6h、24h及48h E-選擇素與Ⅲ組比較均有下降,但兩組相比只有3h、6h有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 6 vWF檢測結(jié)果:Ⅰ組有少量vWF的表達,Ⅱ組與Ⅰ組比較稍有增高(P＞0.05);Ⅲ組與Ⅳ組vWF均高于Ⅰ組和Ⅱ組(P＜0.05);Ⅲ組3h

10、 vWF有明顯升高,6h達高峰,24h后呈下降趨勢,Ⅳ組3h、6h、24h及48h vWF與Ⅲ組比較均有下降,兩組3h、6h、24h比較均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 7 iNOS檢測結(jié)果:Ⅰ組iNOS蛋白表達較弱,Ⅱ組略有增強(P＞0.05);Ⅲ組iNOS蛋白表達高于Ⅰ組和Ⅱ組(P＜0.05);Ⅲ組3h iNOS蛋白表達即有明顯增強,6h達高峰,24h后呈減少趨勢,但仍維持較高水平,Ⅳ組3h、6h、24h及48h iN

11、OS蛋白表達與Ⅲ組比較均有減弱(P＜0.05)。
　　 8 eNOS檢測結(jié)果:Ⅰ組eNOS蛋白表達最強,Ⅱ組表達稍減弱(P＞0.05);Ⅲ組eNOS蛋白表達低于Ⅰ組和Ⅱ組(P＜0.05);Ⅲ組3h eNOS蛋白表達即有明顯減少,6h達最低,24h后較前增強,Ⅳ組3h、6h、24h及48h eNOS蛋白表達與Ⅲ組比較均有增強,兩組比較除48h外均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論
　　 1應(yīng)用CLP的方法成