辛伐他汀對膿毒癥早期大鼠肝臟損害的影響.pdf

1、目的：
　　膿毒癥(sepsis)是感染病原體與宿主免疫系統(tǒng)、炎癥反應、凝血反應之間相互作用，造成機體器官功能損害的復雜臨床綜合癥，是創(chuàng)傷、燒傷、休克、感染等臨床急危重癥患者的嚴重并發(fā)癥。膿毒癥進一步發(fā)展可引起嚴重膿毒癥(severe sepsis)、膿毒性休克(septic shock)、多器官功能障礙綜合征(Multiple organ dysfunction
　　syndrome，MODS)，也是引起嬰幼兒死亡的主要原

2、因之一。近年眾多研究表明，辛伐他汀除降低血脂作用外，還具有抗炎、調節(jié)免疫、減輕氧化應激損傷、保護血管內皮細胞、抗凝和改善血脂代謝作用。辛伐他汀的這種多效作用功能可能對膿毒癥患者臟器具有保護作用，對防止膿毒癥進一步發(fā)展為MODS有著重要的意義。此外，肝臟是機體進行物質和能量代謝的重要器官。在膿毒癥早期，肝臟作為一個重要的靶器官成為遭受內毒素攻擊的首要器官，其功能、結構和代謝的變化決定了病情的發(fā)展。本課題研究辛伐他汀對膿毒癥早期大鼠肝臟功能

3、和病理學改變的影響，并通過觀察炎癥因子（TNF-a、IL-6、IL-10）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）、血脂等指標的變化，探討辛伐他汀對膿毒癥早期大鼠肝臟是否具有保護作用及其相關機制，為膿毒癥患者早期使用辛伐他汀治療提供理論依據。
　　方法：
　　1.建立動物模型及分組
　　膿毒癥模型采用腹腔注射10mg/kg內毒素(LPS)建立。56只無特定病原體(Specific Pathogen

4、 Free，SPF)級雄性SD大鼠隨機分成3組：生理鹽水對照組（n=8只）：每天通過灌胃針給予生理鹽水1ml口服1次。在第7天大鼠口服生理鹽水后，立即腹腔注射等容量生理鹽水，于6小時采集標本后處死。前期試驗已證明，對照組大鼠腹腔注射生理鹽水后，不同時點各對照組大鼠之間血液各項檢測指標差異無統(tǒng)計學意義。LPS+生理鹽水組（n=24只）：每天通過灌胃針給予生理鹽水1ml口服1次。在第7天大鼠口服生理鹽水后，立即腹腔注射LPS10mg/kg，

5、于6小時、12小時、24小時3個時間點采集標本后處死，每個時間點8只(n=8只)；LPS+辛伐他汀組（n=24只）：每天通過灌胃針給予辛伐他汀20mg/kg口服1次，在第7天大鼠口服辛伐他汀后，立即腹腔注射LPS10mg/kg，于6小時、12小時、24小時3個時間點采集標本后處死，每個時間點8只(n=8只)。
　　2.檢測指標及方法
　　2.1大鼠一般情況
　　觀察正常對照大鼠和注射LPS后3h、6h、12h、24h各

6、組大鼠的精神狀態(tài)，有無發(fā)熱、豎毛、腹瀉及皮膚黏膜出血情況，并測量肛溫、心率和呼吸頻率。
　　2.2大鼠肝功能指標
　　肝功能指標：運用全自動生化分析儀檢測各組大鼠血清ALT和AST水平
　　2.3大鼠炎癥反應指標
　　運用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附分析法(ELISA法)檢測生理鹽水對照組大鼠和注射LPS后6h、12h、24h各組大鼠血清TNF-α、IL-6、IL-10水平。
　　2.4大鼠肝臟氧化應激反應指標<

7、br>　　運用硫代巴比妥酸(TBA)法檢測各組大鼠肝組織臟MDA含量；運用黃嘌呤氧化酶法測定各組大鼠肝臟組織SOD活性。
　　2.5大鼠肝臟組織一氧化氮含量
　　運用硝酸還原酶法測定各組大鼠肝臟組織NO含量。
　　2.6大鼠血脂代謝指標
　　運用全自動生化分析儀檢測各組大鼠血清TC、TG、HDL和LDL水平。
　　2.7大鼠肝臟組織病理切片觀察
　　3.統(tǒng)計方法
　　獲得的數據用SPSS l7.

8、0統(tǒng)計軟件進行分析，結果用均值±標準差(sx±)表示；多組間比較采用單因素方差分析，兩組間均數比較采用獨立樣本t檢驗；相關性分析采用Pearson相關分析；P＜0．05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果：
　　1.動物一般情況
　　LPS+生理鹽水組和LPS+辛伐他汀組均出現(xiàn)膿毒癥相關癥狀，包括精神萎靡，發(fā)熱，豎毛，腹瀉，呼吸、心率顯著升高。
　　2.大鼠肝功能指標
　　各組大鼠血清ALT和AST水平的比較

9、r>　　與生理鹽水對照相比，LPS+生理鹽水組和LPS+辛伐他汀組腹腔注射LPS后6h、12h、24h血清ALT、AST水平均明顯升高(P＜0.05)；與24小時LPS+生理鹽水組相比，24小時LPS+辛伐他汀組血清ALT、AST明顯降低(P＜0.05)；6h、12h LPS+辛伐他汀組大鼠血清ALT、AST水平與6h、12h LPS+生理鹽水組相比無明顯差異性(P＞0.05)。
　　3.大鼠炎癥反應指標
　　3.1各組大鼠

10、血清TNF-α水平的比較
　　與生理鹽水對照組相比，LPS+生理鹽水組和LPS+辛伐他汀組腹腔注射LPS后6h、12h、24h血清TNF-α水平均明顯升高(P＜0.05)，以6小時組血清TNF-α水平升高最為
　　顯著；與6h LPS+生理鹽水組相比，6h LPS+辛伐他汀組血清TNF-α水平明顯降低(P＜0.05)；12h、24h LPS+辛伐他汀組大鼠血清TNF-α水平與12h、24h LPS+生理鹽水組相比無明顯差異(

11、P＞0.05)。
　　3.2各組大鼠血清IL-6水平的比較
　　與生理鹽水對照組相比，LPS+生理鹽水組和LPS+辛伐他汀組腹腔注射LPS后6h、12h、24h血清IL-6水平均明顯升高(P＜0.05)，以6小時組血清IL-6水平升高最為顯著；與6h、12h LPS+生理鹽水組相比，6h、12h LPS+辛伐他汀組血清IL-6水平明顯降低(P＜0.05)；24h LPS+辛伐他汀組血清IL-6水平與24h LPS+生理鹽水組

12、相比無明顯差異(P＞0.05)。
　　3.3各組大鼠血清IL-10水平的比較
　　與生理鹽水對照組相比，LPS+生理鹽水組和LPS+辛伐他汀組腹腔注射LPS后6h、12h、24h血清IL-10水平均明顯升高(P＜0.05)，以6小時組血清IL-10水平升高最為顯著；與6h、12h LPS+生理鹽水組相比，6h、12h LPS+辛伐他汀組血清IL-10水平明顯升高(P＜0.05)；24h LPS+辛伐他汀組血清IL-10水平與

13、24h LPS+生理鹽水組相比無明顯差異(P＞0.05)。
　　4.大鼠肝臟氧化應激反應指標
　　4.1各組大鼠肝臟組織MDA含量的比較
　　與生理鹽水對照組相比，LPS+生理鹽水組和LPS+辛伐他汀組腹腔注射LPS后6h、12h肝臟組織MDA含量明顯升高(P＜0.05)，24h時無明顯差異(P＞0.05)；與6h、12h
　　LPS+生理鹽水組相比，6h、12h LPS+辛伐他汀組肝臟組織MDA含量明顯降低(P

14、＜0.05)；24h LPS+辛伐他汀肝臟組織MDA含量與24h LPS+生理鹽水組相比無明顯差異(P＞0.05)。
　　4.2各組大鼠肝臟組織SOD活性的比較
　　與生理鹽水對照組相比，LPS+生理鹽水組和LPS+辛伐他汀組腹腔注射LPS后6h、12h、24h肝臟組織SOD活性明顯降低(P＜0.05)，6h、12h、24h LPS+辛伐他汀組大鼠肝臟組織SOD活性與6h、12h、24h LPS+生理鹽水組相比無明顯差異(P

15、＞0.05)。
　　5.大鼠肝臟組織NO含量
　　與生理鹽水對照組相比，LPS+生理鹽水組和LPS+辛伐他汀組大鼠腹腔注射LPS后6h、12h肝臟組織NO含量明顯升高(P＜0.05)，24h時無明顯差異(P＞0.05)；6h、12h、24h LPS+辛伐他汀組大鼠肝臟組織NO含量與6h、12h、24h LPS+生理鹽水組相比無明顯差異(P＞0.05)。
　　6.大鼠血脂代謝指標
　　與生理鹽水對照組相比，12h、

16、24h LPS+生理鹽水組和12 LPS+辛伐他汀組血清TC水平明顯升高(P＜0.05)；與24h LPS+生理鹽水組相比，24h LPS+辛伐他汀組血清TC水平明顯降低(P＜0.05)；6h、12h LPS+辛伐他汀組大鼠血清TC水平與6h、12h LPS+生理鹽水組相比無明顯差異(P＞0.05)。
　　與生理鹽水對照組相比，LPS+生理鹽水組和LPS+辛伐他汀組腹腔注射LPS后6h、12h、24h血清TG水平明顯升高(P＜0.

17、05)；與6h LPS+生理鹽水組相比，6h LPS+辛伐他汀組血清TG水平明顯降低(P＜0.05)；12h、24h LPS+辛伐他汀組大鼠血清TG水平與12h、24h LPS+生理鹽水組相比無明顯差異(P＞0.05)。
　　與生理鹽水對照組相比，LPS+生理鹽水組和LPS+辛伐他汀組大鼠腹腔注射LPS后6h、12h、24h血清HDL水平無明顯改變(P＞0.05)；與24h LPS+生理鹽水組相比，24h LPS+辛伐他汀組血清H

18、DL水平明顯降低(P＜0.05)；6h、12h LPS+辛伐他汀組大鼠血清HDL水平與6h、12h LPS+生理鹽水組相比無明顯差異(P＞0.05)。
　　與生理鹽水對照組相比，12h、24h LPS+生理鹽水組和6h、12 LPS+辛伐他汀組血清LDL水平明顯升高(P＜0.05)；6h、12h、24h LPS+辛伐他汀組大鼠血清LDL水平與6h、12h、24h LPS+生理鹽水組相比無明顯差異(P＞0.05)。
　　7.肝

19、臟病理切片顯微鏡觀察
　　生理鹽水對照組肝臟細胞形態(tài)正常。LPS+生理鹽水6小時組大鼠肝臟病理切片即出現(xiàn)肝細胞水腫樣改變，肝索排列紊亂，并可見少量炎癥細胞侵潤，12小時組大鼠肝細胞水腫加重，大量炎癥細胞侵潤，伴有少量出血，在24小時組則可觀察到局灶性肝細胞壞死，而各時點LPS+辛伐他汀組較LPS+生理鹽水組有改善。
　　8.大鼠各指標的相關性分析
　　大鼠血清ALT、AST水平與血清TNF-α、IL-6、IL-10水平

20、呈正相關，6小時與TNF-α相關系數分別為0.881(P＜0.05)和0.908(P＜0.05)、與 IL-6相關系數分別為0.854(P＜0.05)和0.919(P＜0.05)、與IL-10相關系數分別為0.849(P＜0.05)和0.941(P＜0.05)；12小時與TNF-α相關系數分別為0.818(P＜0.05)和0.799(P＜0.05)、與IL-6相關系數分別為0.921(P＜0.05)和0.938(P＜0.05)；與IL-

21、10相關系數分別為0.895(P＜0.05)和0.927(P＜0.05)；24小時與TNF-α相關系數分別為0.748(P＜0.05)和0.672(P＜0.05)、與IL-6相關系數分別為0.775(P＜0.05)和0.852(P＜0.05)、與IL-10相關系數分別為0.779(P＜0.05)和0.905(P＜0.05)。
　　大鼠血清ALT、AST水平與肝臟組織MDA含量在6小時和12小時呈正相關，6小時相關系數分別為0.67

22、4(P＜0.05)和0.705(P＜0.05)；12小時相關系數分別為0.570(P＜0.05)和0.620(P＜0.05)；24小時大鼠血清ALT、AST水平與肝臟組織MDA含量無相關性，相關系數分別為0.296(P＞0.05)和0.333(P＞0.05)。
　　大鼠血清ALT、AST水平與肝臟組織SOD活性呈負相關，6小時相關系數分別為-0.675(P＜0.05)和-0.559(P＜0.05)；12小時相關系數分別為-0.52

23、1(P＜0.05)和-0.446(P＜0.05)；24小時相關系數分別為-0.600(P＜0.05)和-0.562(P＜0.05)。
　　大鼠血清ALT、AST水平與肝臟組織NO含量在6小時和12小時呈正相關，6小時相關系數分別為0.840(P＜0.05)和0.898(P＜0.05)；12小時相關系數分別為0.858(P＜0.05)和0.924(P＜0.05)；24小時大鼠血清ALT、AST水平與肝臟組織NO含量無相關性，相關系數