rhTNFR-FC對膿毒癥大鼠肝臟的保護作用.pdf

1、目的:研究益賽普(rhTNFR:Fc)對膿毒癥大鼠血清中腫瘤壞死因子(TNF-α)、白細胞介素-1(IL-1)、鳥氨酸氨基甲酰轉移酶(OCT)、肝臟組織中核因子-κB(NF-κB)的表達及肝臟組織功能損害的影響,探討 rhTNFR:Fc對膿毒癥大鼠的肝臟是否具有保護作用。
　　方法: SD大鼠90只,雌雄不拘,隨機分為3組:(1)對照組(n=30),膿毒癥組(n=30),治療組(n=30);(2)對照組大鼠于麻醉后開腹翻動盲腸后關

2、腹,分別在術后6、12、24、36 h和48 h五個時相點從腹主動脈抽取血標本,采用酶聯(lián)免疫分析法檢測腫瘤壞死因子(TNF-α)、白細胞介素-1(IL-1)、鳥氨酸氨基甲酰轉移酶(OCT);打開腹腔,采取黃豆大小肝臟組織,做蛋白質印跡實驗(Western blot)檢測肝臟NF-κB蛋白含量,再取少許肝組織行病理切片觀察肝臟組織炎癥變化情況。每個時相點6只大鼠。(3)膿毒癥組大鼠麻醉后行盲腸結扎穿孔術(CLP),制造膿毒癥大鼠模型,分別

3、于術后6、12、24、36 h和48 h五個時相點行與對照組相同的操作步驟。每個時相點6只大鼠。(4)治療組大鼠行CLP,術后立即經尾靜脈注射rhTNFR:Fc0.5mg/kg,分別于術后6、12、24、36 h和48 h五個時相點行與膿毒癥組相同的操作步驟。每個時相點6只大鼠。(5)所有數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件包進行分析,組間比較行單因素方差分析,相關性分析采用Spearman等級相關分析。
　　結果:
　　1.血

4、清TNF-α水平變化:膿毒癥組、治療組血清TNF-α水平在術后6 h時相點為最大值,隨著時間推移,兩組濃度水平呈下降趨勢,但仍高于對照組,在CLP術后各時相點,膿毒癥組及治療組與對照組比較差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。治療組血清TNF-α水平較膿毒癥組低,在術后各時相點與膿毒癥組比較差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　2.血清IL-1水平變化:膿毒癥組和治療組血清IL-1水平在術后6 h時相點為最大值,隨著時間推移,兩

5、組濃度水平呈下降趨勢,但仍高于假手術對照組,在CLP術后各時相點,膿毒癥組及治療組與對照組比較差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。治療組血清IL-1水平較膿毒癥組低,在術后各時相點與膿毒癥組比較差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　3.血清OCT水平變化:膿毒癥組和治療組在CLP術后6 h血清OCT水平即明顯升高,與對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01),治療組血清中OCT水平較膿毒癥組低,在術后各時相點與膿毒癥組比較差異

6、具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　4.病理切片結果顯示:正常對照組肝臟組織形態(tài)、結構完整,未見炎癥細胞浸潤;膿毒癥組肝細胞腫脹變性,局灶性肝細胞壞死,廣泛淤血,匯管區(qū)炎癥細胞浸潤明顯;益賽普藥物治療組病變明顯較膿毒癥組減輕。
　　5.Western-blot結果顯示:膿毒癥組的電泳條帶的面積明顯大于治療組和對照組,顏色也較治療組和對照組偏深。治療組的電泳條帶的面積和顏色深度高于對照組,但較膿毒癥組低。
　　6.TN

7、F-α、IL-1及OCT之間的相關性分析結果:
　　1).TNF-α與OCT具有顯著正相關,相關系數(shù)為0.946,P<0.01;
　　2).OCT與IL-1具有顯著正相關,相關系數(shù)為0.978,P<0.01;
　　3).TNF-α與IL-1具有顯著正相關,相關系數(shù)為0.974,P<0.01。
　　結論:
　　1.肝臟組織NF-κB蛋白的表達量增加以及病理切片結果均提示膿毒癥大鼠肝臟組織中存在炎癥反應過程;同

8、時OCT升高,表示肝臟在膿毒癥早期即發(fā)生損傷。
　　2.膿毒癥大鼠血清中TNF-α、IL-1等炎癥因子異常升高,是引起全身炎癥反應和膿毒癥引起肝臟炎性損傷的主要因子。
　　3.rhTNFR:Fc可以減少膿毒癥大鼠血清中TNF-α、IL-1等炎癥因子的釋放,也降低了核因子-κB(NF-κB)在肝臟組織中的表達,可能是干擾了由膿毒癥引起的肝臟炎癥反應的核心環(huán)節(jié),從而減輕肝臟的炎性損傷。
　　4.rhTNFR:Fc作為TNF