阿托伐他汀對(duì)膿毒癥大鼠腸黏膜屏障功能的保護(hù)作用.pdf

1、目的：采用腹腔注射脂多糖(LPS)方法制備大鼠膿毒癥模型，研究阿托伐他汀預(yù)處理對(duì)膿毒癥大鼠腸黏膜屏障功能的保護(hù)作用及其機(jī)制。
　　方法：選擇清潔級(jí)健康雄性SD大鼠90只，隨機(jī)分為對(duì)照組（CON組）、膿毒癥組(SEP組)和膿毒癥+阿托伐他汀預(yù)處理組(ATR組)，每組30只;每組再根據(jù)時(shí)間點(diǎn)分為0h、2h、6h、12h、24 h，5個(gè)亞組，每亞組6只。SEP組和ATR組大鼠腹腔注LPS(5 mg/kg)建立膿毒癥大鼠模型，CON組腹腔

2、注射等量生理鹽水;ATR組大鼠在造模前5天開始給予阿托伐他汀(20 mg·kg-1·day-1)灌胃，每天1次，連續(xù)5天，CON組和SEP組給予等量生理鹽水灌胃。各組分別于給藥后0h、2h、6h、12h、24 h處死大鼠，開腹取小腸標(biāo)本，采血。酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)測(cè)血漿二胺氧化酶(DAO)活性、腸型脂肪酸結(jié)合蛋白(I-FABP)濃度;原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記技術(shù)（TUNEL法）熒光標(biāo)記腸組織凋亡細(xì)胞;實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PC

3、R)法檢測(cè)小腸組織Toll樣受體4(TLR4) mRNA相對(duì)表達(dá)量;小腸組織切片行蘇木精-伊紅(HE)染色，在光鏡下觀察小腸組織病理形態(tài)學(xué)。
　　結(jié)果：1、血漿DAO活性0h，三組動(dòng)物血漿的DAO活性無差異(P＞0.05)，其余各時(shí)間點(diǎn)SEP組和ATR組的血漿DAO活性均顯著高于CON組，且SEP組高于ATR組(P＜0.05)。不同時(shí)間點(diǎn)亞組間的比較:CON組各時(shí)間點(diǎn)血漿DAO活性無明顯變化(P＞0.05); SPE組血漿DAO活

4、性隨時(shí)間延長呈上升趨勢(shì)，各時(shí)間點(diǎn)兩兩比較均有差異(P＜0.05)。在前四個(gè)時(shí)間點(diǎn)，ATR組血漿DAO活性呈上升趨勢(shì)(P＜0.05)，但24 h組未再進(jìn)一步升高，與12h組相比無差異(P＞0.05)。
　　2、血漿I-FABP濃度0h，三組動(dòng)物血漿的I-FABP濃度比較無差異(P＞0.05)，其余各時(shí)間點(diǎn)SEP組和ATR組的血漿I-FABP濃度均顯著高于CON組，且SEP組高于ATR組（P＜0.05）。不同時(shí)間點(diǎn)亞組間比較:CON組

5、各個(gè)時(shí)間點(diǎn)I-FABP濃度無明顯變化(P＞0.05);SPE組和ATR組血漿I-FABP濃度隨時(shí)間延長呈上升趨勢(shì)(P＜0.05)，各時(shí)間點(diǎn)兩兩比較均有差異(P＜0.05)。
　　3、細(xì)胞凋亡觀察熒光標(biāo)記腸組織凋亡細(xì)胞，0h，各組腸組織未見熒光標(biāo)記點(diǎn)，在2h、6h、12h、24 h時(shí)間點(diǎn)，SEP組和ATR組的熒光標(biāo)記的腸組織凋亡細(xì)胞明顯多于CON組，且隨著時(shí)間增加，凋亡細(xì)胞逐漸增多。在同一時(shí)間點(diǎn)，SEP組熒光標(biāo)記的凋亡細(xì)胞多于ATR

6、組。
　　4、TLR4 mRNA的相對(duì)表達(dá)量比較在0h、2h，三組TLR4 mRNA的相對(duì)表達(dá)量無差異(P＞0.05);在6h，SEP組TLR4 mRNA的相對(duì)表達(dá)量高于CON組、ATR組(P＜0.05)，ATR組與CON組無差異（P＞0.05）;在12h、24 h，SEP組和ATR組TLR4 mRNA的相對(duì)表達(dá)量均顯著高于CON組，且SEP組高于ATR組(P＜0.05)。不同時(shí)間點(diǎn)亞組間的比較:各時(shí)間點(diǎn)，CON組TLR4 mRN

7、A的相對(duì)表達(dá)量無差異(P＞0.05);在0h、2h，SPE組和ATR組TLR4 mRNA的相對(duì)表達(dá)量無差異(P＞0.05)，6h后，TLR4 mRNA的相對(duì)表達(dá)量顯著升高，且隨著時(shí)間延長呈上升趨勢(shì)(P＜0.05)。
　　5、組織病理學(xué)CON組小腸黏膜各層結(jié)構(gòu)完整，形態(tài)正常，絨毛排列整齊;SEP組腸壁變薄，黏膜明顯萎縮，絨毛短縮，上皮壞死脫落，大量中性粒細(xì)胞及嗜酸性粒細(xì)胞細(xì)胞浸潤;ATR組腸黏膜組織基本完整，絨毛整齊，但可見輕度萎縮