活化蛋白-1在大鼠內(nèi)毒素休克急性肺損傷時(shí)血紅素氧合酶-1表達(dá)中的作用.pdf

1、內(nèi)毒素誘發(fā)的急性肺損傷/急性呼吸窘迫綜合征(ALI/ARDS)是臨床上常見的急危重癥，是感染性休克導(dǎo)致死亡的主要原因之一，因此探索其有效的防治措施具有一定的臨床意義。
　　 血紅素氧合酶-1(HO-1)為誘導(dǎo)型，是一種應(yīng)激蛋白，又被稱為熱休克蛋白-32（heat shock protein-32，HSP-32），其廣泛存在于各種細(xì)胞和組織。HO-1是催化血紅素降解為CO、膽紅素和鐵的限速酶，HO-1及其催化產(chǎn)物是機(jī)體重要的內(nèi)源性

2、防御保護(hù)系統(tǒng)，在維持細(xì)胞穩(wěn)定和調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。除血紅素外，內(nèi)毒素、休克、應(yīng)激、高氧等也可誘導(dǎo)HO-1表達(dá)。有研究發(fā)現(xiàn)，LPS誘導(dǎo)的ALI大鼠中，α硫辛酸可通過上調(diào)HO-1的表達(dá)發(fā)揮肺組織保護(hù)作用。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，內(nèi)毒素休克大鼠肺組織中HO-1表達(dá)上調(diào)并對(duì)肺臟發(fā)揮保護(hù)作用。
　　 活化蛋白-1(AP-1)是信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中重要的轉(zhuǎn)錄因子復(fù)合物，能與許多基因上的AP-1位點(diǎn)結(jié)合，在細(xì)胞中發(fā)揮轉(zhuǎn)錄作用。脂多糖(LPS)

3、刺激大鼠RAW264.7巨噬細(xì)胞時(shí)，活化的轉(zhuǎn)錄因子AP-1與HO-1基因啟動(dòng)子區(qū)的AP-1結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合，可導(dǎo)致HO-1表達(dá)上調(diào)并發(fā)揮細(xì)胞保護(hù)作用[8-10]。然而在LPS誘導(dǎo)的大鼠內(nèi)毒素休克急性肺損傷模型中，AP-1是否也參與了HO-1表達(dá)上調(diào)尚未定論。因此本研究擬在建立大鼠內(nèi)毒素休克急性肺損傷模型的基礎(chǔ)上，評(píng)價(jià)轉(zhuǎn)錄因子AP-1在HO-1表達(dá)中的作用，為探討內(nèi)毒素休克急性肺損傷時(shí)機(jī)體內(nèi)源性保護(hù)機(jī)制提供參考。
　　 目的：探討轉(zhuǎn)錄

4、因子AP-1在大鼠內(nèi)毒素休克ALI時(shí)HO-1表達(dá)中的作用。
　　 方法：健康清潔級(jí)雄性Sprague Dawley(SD)大鼠48只，體重200～220 g，2.5～3.0月齡，采用隨機(jī)數(shù)字表法，將其隨機(jī)分為4組(n=12):正常對(duì)照組（C組）、內(nèi)毒素休克急性肺損傷組（ES組）、姜黃素+內(nèi)毒素休克急性肺損傷組（Cur+ES組）、姜黃素組（Cur組）。正常對(duì)照組（C組）腹腔注射0.1％二甲基亞砜（姜黃素溶媒）0.5 ml，30 m

5、in時(shí)股靜脈注射生理鹽水（LPS溶媒）0.5m1;內(nèi)毒素休克肺損傷組（ES組）腹腔注射0.1％二甲基亞砜0.5 ml，30 min時(shí)股靜脈注射10 mg/kg LPS0.5 ml;姜黃素+內(nèi)毒素休克肺損傷組（Cur+ES組）腹腔注射20 mg/kg姜黃素0.5 ml，30 min時(shí)股靜脈注射10 mg/kg LPS0.5 ml;姜黃素組（Cur組）腹腔注射姜黃素20 mg/kg，30 min時(shí)股靜脈注射生理鹽水0.5 ml。觀察動(dòng)物一般

6、情況，持續(xù)監(jiān)測(cè)MAP和心率變化，靜脈注射LPS2 h內(nèi)平均動(dòng)脈壓(MAP)較基礎(chǔ)值降低25％以下并維持該水平為休克模型制備成功標(biāo)志。本實(shí)驗(yàn)中若給予LPS后未滿足上述條件或6h內(nèi)死亡者均排除本觀察組。靜脈注射LPS6 h時(shí)采集動(dòng)脈血0.5 ml行血?dú)夥治鲇?jì)算氧合指數(shù)，隨后處死大鼠留取肺組織，觀察肺組織病理學(xué)結(jié)果，行肺損傷程度評(píng)分、計(jì)算肺組織含水率、測(cè)定肺組織MDA含量和SOD活性;采用Western blot免疫印跡法分別測(cè)定大鼠肺組織H

7、O-1和AP-1蛋白的表達(dá);采用反轉(zhuǎn)錄酶-聚合酶鏈鎖反應(yīng)(reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR)法測(cè)定大鼠肺組織HO-1mRNA表達(dá)。
　　 結(jié)果：與C組比較，ES組和Cur+ES組肺損傷程度評(píng)分、肺組織含水率、氧合指數(shù)和MDA含量升高，SOD活性降低， AP-1、HO-1和HO-1 mRNA表達(dá)上調(diào)（P＜0.05），Cur組上述各指標(biāo)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞

8、0.05);與ES組比較，Cur+ES組肺損傷程度評(píng)分、肺組織含水率和MDA含量升高，SOD活性降低，AP-1、HO-1和HO-1mRNA表達(dá)下調(diào)(P＜0.05);與Cur+ES組比較，Cur組肺損傷程度評(píng)分、肺組織含水率和MDA含量降低，氧合指數(shù)和SOD活性升高，AP-1、HO-1和HO-1mRNA表達(dá)下調(diào)(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：LPS誘導(dǎo)大鼠內(nèi)毒素休克ALI時(shí)，轉(zhuǎn)錄因子AP-1參與調(diào)節(jié)HO-1表達(dá)上調(diào)。