ERK1-2和NF-κB信號(hào)通路在電針上調(diào)內(nèi)毒素休克兔急性肺損傷血紅素氧合酶-1表達(dá)中的作用.pdf

1、內(nèi)毒素休克是臨床上的急危重癥，可導(dǎo)致多器官功能障礙，其中肺臟是最易受損的器官。有研究表明，革蘭氏陰性菌所釋放的內(nèi)毒素或脂多糖(LPS)誘發(fā)了內(nèi)毒素休克的肺損傷。內(nèi)毒素休克時(shí)肺臟血紅素氧合酶-1(HO-1)作為內(nèi)源性保護(hù)因素表達(dá)增加;電針足三里和肺俞可通過上調(diào)HO-1表達(dá)，減輕內(nèi)毒素休克誘發(fā)的急性肺損傷。但是，電針上調(diào)HO-1表達(dá)的信號(hào)通路及轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制目前尚未闡明。
　　HO-1的保護(hù)作用涉及眾多靶點(diǎn)，包括蛋白激酶(MAPKs)和不同

2、的轉(zhuǎn)錄因子。細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2(extracellular signal-regulated kinases，ERK1/2)是最常見的MAPK家庭成員。有研究表明抗炎因子HO-1通過ERK1/2信號(hào)通路抑制LPS誘發(fā)的炎癥反應(yīng);電針刺能顯著增加ERK1/2的磷酸化水平。NF-κB是一類核轉(zhuǎn)錄因子，LPS等因素可使其活化，發(fā)揮調(diào)節(jié)炎性反應(yīng)和抗氧化應(yīng)激的作用。有研究表明，NF-κB可誘導(dǎo)HO-1表達(dá)的上調(diào);電針的免疫調(diào)節(jié)及臟器保護(hù)的作

3、用是通過激活NF-κB信號(hào)通路的表達(dá)來實(shí)現(xiàn)。但是ERK1/2和NF-κB是否與電針上調(diào)HO-1表達(dá)有關(guān)尚有待研究。本研究探討了ERK1/2和NF-κB信號(hào)通路在電針上調(diào)內(nèi)毒素休克兔急性肺損傷HO-1表達(dá)中的作用。
　　目的探討ERK1/2信號(hào)通路和NF-κB信號(hào)通路在電針上調(diào)內(nèi)毒素休克兔急性肺臟損傷HO-1中的作用。
　　方法健康雄性新西蘭大白兔70只，體重1.5～2.0 kg，采用隨機(jī)數(shù)字表法分為7組(n=10):對(duì)照組（

4、C組）、無水乙醇組（D組）、模型組（M組）、假電針+模型組（SEAM組）、電針+模型組（EAM組）、ERK抑制劑PD98059組、電針+模型+PD98059組（EAMPD組）。M、SEAM、EAM、EAMPD組經(jīng)耳緣靜脈緩慢注入LPS5mg/kg0.5ml（溶于0.9％生理鹽水），C、D、PD組耳緣靜脈注射0.9％生理鹽水0.5ml。靜脈注射脂多糖各組以血壓在2h內(nèi)下降75％，氧合指數(shù)≤300為模型成功標(biāo)志。術(shù)前1～4 d及手術(shù)當(dāng)日LP

5、S造模前0.5h，電針肺俞穴和足三里穴（疏密波頻率2/15Hz，刺激電流1～2 mA，以兔出現(xiàn)輕微肌顫為宜，持續(xù)刺激30 min），1次/d。LPS或生理鹽水靜脈注射前0.5h，PD組、EAMPD組耳緣靜脈輸注0.3 mg/kg（溶于0.5ml無水乙醇），其余各組給予0.51ml無水乙醇。注射脂多糖（C、D、PD組為靜注生理鹽水后）6h后放血處死動(dòng)物，取肺組織，觀察病理學(xué)結(jié)果，并進(jìn)行病理學(xué)評(píng)分，計(jì)算肺濕/干重比;采用熒光定量PCR法測(cè)定

6、HO-1 mRNA的表達(dá);采用Western blot法測(cè)定HO-1及ERK1/2蛋白的表達(dá)。健康雄性新西蘭大白兔60只，體重1.5～2.0 kg，采用隨機(jī)數(shù)字表法分為6組(n=10):對(duì)照組（C組）、模型組（M組）、假電針+模型組(SEAM組)、電針+模型組（EAM組）、NF-κB抑制劑PDTC組、電針+模型+PDTC組（EAMP組）。M組、SEAM組、EAM組和EAMP組靜脈注射脂多糖5 mg/kg以制備內(nèi)毒素休克性急性肺損傷模型，

7、C組和PDTC組給予等容量生理鹽水。靜脈注射脂多糖或生理鹽水前0.5h，PDTC組和EAPD組脈輸注PDTC20 mg/kg，其余各組給予等容量生理鹽水。術(shù)前1～4 d及手術(shù)當(dāng)日LPS造模前0.5 h，電針肺俞穴和足三里穴（疏密波頻率2/15Hz，刺激電流1～2 mA，以兔出現(xiàn)輕微肌顫為宜，持續(xù)刺激30 min），1次/d。給予LPS6 h后放血處死動(dòng)物，取肺組織，觀察病理學(xué)結(jié)果，并進(jìn)行病理學(xué)評(píng)分，計(jì)算肺濕/干重比;采用熒光定量PCR法

8、測(cè)定HO-1 mRNA的表達(dá);采用Western blot法測(cè)定HO-1及NF-κBp65蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果與C組比較，M組、SEAM組、EAM組、EAMPD組肺組織病理學(xué)評(píng)分、W/D比、TNF-α、MDA含量升高，SOD活性降低，肺組織HO-1蛋白及HO-1mRNA、ERK蛋白與p-ERK蛋白表達(dá)增加(P＜0.05)，D、PD組上述指標(biāo)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);與M組比較，EAM組肺組織病理學(xué)評(píng)分、W/D比、TNF-

9、α、MDA含量降低，SOD活性升高，肺組織HO-1蛋白及HO-1mRNA、ERK蛋白及p-ERK蛋白表達(dá)上調(diào)，EAMPD組、SEAM組上述指標(biāo)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);與EAM組比較，EAMPD組肺組織病理學(xué)評(píng)分、W/D比、TNF-α、MDA含量升高，SOD活性降低，肺組織HO-1蛋白及HO-1mRNA、ERK蛋白與p-ERK蛋白表達(dá)下調(diào)(P＜0.05)。與C組比較，M組、SEAM組、EAM組、EAMP組肺組織病理學(xué)評(píng)分、W/D

10、比、MDA含量升高，SOD活性降低，肺組織HO-1蛋白及其mRNA、總NF-κ Bp65蛋白、核內(nèi)NF-κBp65蛋白表達(dá)上調(diào)(P＜0.05)，PDTC組上述指標(biāo)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);與M組比較，EAM組肺組織病理學(xué)評(píng)分、W/D比、MDA含量降低，SOD活性升高，肺組織HO-1蛋白及其mRNA、總NF-κBp65蛋白、核內(nèi)NF-κBp65蛋白表達(dá)上調(diào)，EAMP組、SEAM組上述指標(biāo)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);與EAM組