版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、背景:miRNA-200c是miRNA200家族重要的成員之一,大量研究表明miRNA-200c可作為許多腫瘤篩查分子標(biāo)志物和預(yù)后判斷的重要指標(biāo),其能夠抑制上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化和腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移,增加腫瘤細(xì)胞對(duì)抗腫瘤藥物的敏感性。氨甲喋呤(Methotrexate,MTX)是目前應(yīng)用最廣泛的抗葉酸制劑,然而應(yīng)用MTX治療極易產(chǎn)生獲得性耐藥,耐藥后轉(zhuǎn)移是其治療失敗的主要原因。探尋影響耐藥后的腫瘤細(xì)胞遷移和侵襲能力的相關(guān)分子,以便進(jìn)一步研究和掌握耐藥的
2、作用機(jī)理,作為腫瘤的攻克及控制的分子理論依據(jù),從而為克服MTX獲得性耐藥后腫瘤侵襲力增加的治療提供思路。E-cad(E-cadherin,E-cad)是一類鈣依賴性跨膜糖蛋白,有研究者認(rèn)為其表達(dá)或功能異常與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移密切相關(guān),且有研究表明其受Zeste基因增強(qiáng)子同源物2(Enhancer ofzeste homolog2,EZH2)調(diào)節(jié)來改變對(duì)細(xì)胞遷移及侵襲的影響。本研究以肺癌A549/MTX細(xì)胞作為研究對(duì)象,研究miRNA
3、-200c對(duì)A549/MTX耐藥細(xì)胞遷移和侵襲能力的作用,及其與EZH2/E-cad通路的相關(guān)性。
目的:探討miRNA-200c對(duì)A549/MTX耐藥細(xì)胞遷移和侵襲力的作用,同時(shí)研究miRNA-200c對(duì)A549/MTX耐藥細(xì)胞遷移和侵襲力的作用與EZH2/E-cad信號(hào)通路之間的關(guān)系。
方法:通過藥物濃度逐漸增加并結(jié)合低劑量持續(xù)誘導(dǎo)的方法,誘導(dǎo)培養(yǎng)獲得25μM甲氨蝶呤(MTX)耐受的肺癌A549細(xì)胞系(A549/
4、MTX),然后來分別觀察誘導(dǎo)前與誘導(dǎo)后細(xì)胞形態(tài)學(xué)的改變,使用MTT方法檢測A549/MTX細(xì)胞耐藥指數(shù)(Resistance drug index,RI);判斷耐藥細(xì)胞誘導(dǎo)情況,選擇耐藥程度高的細(xì)胞作為主要研究對(duì)象,隨后使用miRNA-200c前體片段和陰性片段轉(zhuǎn)染A549/MTX細(xì)胞株,使用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time fluorescencequantitative-PCR,RT-PCR)來檢測miRNA-200c的表達(dá)量
5、,從而證實(shí)轉(zhuǎn)染是否成功以及轉(zhuǎn)染后的miRNA-200c的表達(dá)量的變化;同時(shí)觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化,另外分別使用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)(Wound Healing)和細(xì)胞遷移侵襲實(shí)驗(yàn)(transwell)來分析轉(zhuǎn)染陽性成功后的耐藥細(xì)胞較轉(zhuǎn)染陰性的耐藥細(xì)胞的遷移與侵襲能力的變化;同時(shí)通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法來了解轉(zhuǎn)染成功后EZH2和E-鈣黏蛋白基因表達(dá)水平的變化,探討miRNA200c對(duì)A549/MTX細(xì)胞遷移和侵襲力產(chǎn)生影響的信號(hào)通路與EZH2/E
6、-cad信號(hào)通路之間的相關(guān)性。
結(jié)果:經(jīng)過誘導(dǎo)得到25μM MTX耐藥的A549細(xì)胞的耐藥指數(shù)為15.7,為高度耐藥。通過轉(zhuǎn)染試劑盒轉(zhuǎn)染細(xì)胞,將25μM MTX高度耐藥的A549細(xì)胞轉(zhuǎn)染miRNA200c的前體片段后的A549/MTX細(xì)胞的miRNA-200c的表達(dá)水平比轉(zhuǎn)染陰性片段的同種耐藥細(xì)胞的miRNA200c表達(dá)量明顯升高,高出約7.2倍,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),間接說明轉(zhuǎn)染是成功的。誘導(dǎo)耐藥后及轉(zhuǎn)染后較敏
7、感細(xì)胞A549細(xì)胞細(xì)胞形態(tài)均發(fā)生變化。細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,經(jīng)miRNA-200c前體片段轉(zhuǎn)染成功的A549/MTX細(xì)胞的遷移和侵襲力較轉(zhuǎn)染陰性的A549/MTX細(xì)胞出現(xiàn)了顯著的降低現(xiàn)象,差異明顯(P<0.05)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。RT-PCR檢測EZH2和E-cad表達(dá)水平的結(jié)果顯示,與轉(zhuǎn)染陰性組比較,miRNA-200c轉(zhuǎn)染成功的A549/MTX細(xì)胞表達(dá)EZH2的水平降低,而表達(dá)E-cad的水平是升高的,兩組之間
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- MTX對(duì)映體誘導(dǎo)A549細(xì)胞耐藥后EGFR基因表達(dá)與侵襲轉(zhuǎn)移差異的研究.pdf
- COPD微環(huán)境對(duì)A549細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響.pdf
- microRNA-200c對(duì)ZEB1表達(dá)影響及對(duì)腫瘤細(xì)胞侵襲遷移作用.pdf
- Angiogenin對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞侵襲和遷移功能的影響及相關(guān)miRNA機(jī)制研究.pdf
- 黃連素對(duì)肺腺癌A549細(xì)胞增殖、遷移和侵襲的影響.pdf
- 膠質(zhì)瘤遷移侵襲關(guān)鍵miRNA的篩選及miR200c功能的初步鑒定.pdf
- miR200c對(duì)卵巢上皮性癌細(xì)胞侵襲、遷移及增殖能力影響的研究.pdf
- HMGA2在鎘誘導(dǎo)的小鼠肺組織和A549細(xì)胞遷移和侵襲中的作用研究.pdf
- IKCa1相關(guān)的miRNA對(duì)HeLa細(xì)胞增殖、遷移及侵襲作用機(jī)制初探.pdf
- 芹菜素對(duì)人肺癌細(xì)胞株A549遷移和侵襲能力的抑制作用及機(jī)制.pdf
- MicroRNA-200c轉(zhuǎn)染前后以外陰鱗癌A-431細(xì)胞侵襲和遷移能力的影響.pdf
- miRNA-373抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞U251遷移及侵襲作用的研究.pdf
- GGT和RalB對(duì)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移及侵襲作用的研究.pdf
- 哇巴因抗腫瘤生長作用及對(duì)A549細(xì)胞遷移的作用.pdf
- 重組人白細(xì)胞介素-11對(duì)肺癌A549細(xì)胞增殖,遷移和侵襲能力的影響.pdf
- miR-200a在膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移侵襲中的作用及其機(jī)制研究.pdf
- PEDF對(duì)肺腺癌A549細(xì)胞遷移、侵襲能力和轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白表達(dá)水平的影響.pdf
- 葡萄籽原花青素對(duì)肺癌A549細(xì)胞侵襲和遷移的影響及其機(jī)制.pdf
- 氧化應(yīng)激介導(dǎo)的自噬在鎘誘導(dǎo)A549細(xì)胞增殖、遷移和侵襲中作用機(jī)制的研究.pdf
- Genistein對(duì)絨癌耐藥細(xì)胞株JAR-MTX侵襲的影響及其機(jī)制的初步探討.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論