miR200c對卵巢上皮性癌細胞侵襲、遷移及增殖能力影響的研究.pdf

1、卵巢上皮性癌（epithelialovariancancer，EOC，簡稱卵巢癌）是女性最常見的婦科惡性腫瘤之一，由于缺乏敏感有效的腫瘤標志物，使得卵巢癌的早期確診率很低，盡管應用現(xiàn)代抗腫瘤藥物配合腫瘤細胞減滅術(shù)治療，晚期卵巢癌患者的5年生存率依然較低，約為30％。術(shù)后復發(fā)和腫瘤耐藥成為卵巢癌治療的最大難題，因此新的卵巢癌治療手段的研發(fā)是婦科亟待解決的問題。
　　 有研究發(fā)現(xiàn)包括卵巢癌在內(nèi)的多種人類腫瘤組織中miR200家族表達

2、譜發(fā)生改變。許多學者在對犬的腎細胞和人類的胰腺癌、直腸癌、前列腺癌和乳腺癌的腫瘤組織及其細胞株的研究中發(fā)現(xiàn)miR200c可以抑制ZEB1的表達。上皮向間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymaltransition，EMT）與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。E-cadherin是鈣依賴性跨膜粘連蛋白的一種，主要分布于上皮細胞表面，介導細胞間的粘附作用。波形蛋白(Vimentin)是間質(zhì)細胞骨架中最主要的中間纖維蛋白，Vimentin

3、被認為是間皮細胞的標志蛋白。E盒結(jié)合鋅指蛋白(zincfingerE-boxbindinghomeobox，ZEB)是一種重要的細胞核轉(zhuǎn)錄因子，它與E-cadherin基因的啟動子序列中的鋅指結(jié)構(gòu)結(jié)合可以抑制E-cadherin的表達。間皮素(Mesothelin)是一種腫瘤表面抗原，它在上皮性卵巢癌組織中的表達顯著上調(diào)。有研究表明間皮素能增強卵巢癌細胞的增殖及粘附侵襲能力。間皮素與CA125互為配體。國內(nèi)關(guān)于miR200c對卵巢癌細胞

4、的增殖及侵襲遷移能力的影響鮮有報道。
　　 目的:通過瞬時轉(zhuǎn)染miR200cmimic，上調(diào)卵巢癌細胞株SKOV3、HO-8910細胞中miR200c的表達，觀察miR200c對卵巢癌細胞的增殖及侵襲遷移能力的影響，初步探討miR200c對卵巢癌細胞增殖及侵襲遷移的調(diào)控機制。
　　 方法:
　　 1、將SKOV3、HO-8910細胞分別分為:空白對照組、miR200cmimic處理組、negativecontro

5、l處理組，RT-PCR檢測各組細胞中miR200c的相對表達量。
　　 2、MTT法檢測轉(zhuǎn)染不同濃度miR200cmimic(0nmol/L、25nmol/L、50nmol/L、100nmol/L、200nmol/L)，培養(yǎng)不同時間(24h、48h、72h)，對SKOV3、HO-8910細胞的增殖能力的影響。
　　 3、Transwell小室檢測各組細胞遷移及侵襲能力的變化。
　　 4、應用Westernblot

6、ting檢測各組中ZEB1、E-cadherin、Vimentin的表達變化。
　　 5、酶聯(lián)免疫吸附實驗檢測間皮素和CA125的表達。
　　 6、統(tǒng)計方法:試驗數(shù)據(jù)應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件處理，各實驗均重復3次。計量資料以均數(shù)±標準差（(x)±s）表示，各組間的比較采用單因素方差分析，檢驗水準α=0.05。當P＜0.05時，差異有統(tǒng)計學意義。
　　 結(jié)果:
　　 1、RT-PCR檢測各組miR200

7、c的相對表達量。SKOV3-mimic和HO-8910-mimic細胞內(nèi)miR200c的表達與SKOV3和HO-8910相比明顯增高(P＜0.05)，而SKOV3-neg和HO-8910-neg的miR200c表達與SKOV3和HO-8910相比差異無顯著性(P＞0.05)。
　　 2、MTT檢測miR200c對SKOV3和HO-8910細胞增殖的影響。轉(zhuǎn)染不同濃度的miR200cmimic后SKOV3與HO-8910細胞的增殖

8、均無明顯改變(P＞0.05)。轉(zhuǎn)染相同濃度的miR200cmimic培養(yǎng)不同的時間對SKOV3、HO-8910的增殖亦無明顯改變(P＞0.05)。
　　 3、miR200c抑制細胞的侵襲能力。上調(diào)miR200c的表達后，SKOV3-mimic、HO-8910-mimic與SKOV3、HO-8910組相比穿過基質(zhì)膜細胞數(shù)明顯減少(P＜0.05)。而SKOV3-neg、HO-8910-neg組細胞數(shù)與SKOV3、HO-8910組相比

9、細胞數(shù)無明顯改變（P＞0.05），提示miR200c可以顯著抑制SKOV3、HO-8910細胞的侵襲能力。
　　 4、miR200c抑制細胞的遷移能力。上調(diào)miR200c的表達后，SKOV3-mimic組和HO-8910-mimic組與SKOV3組和HO-8910組相比遷移到濾膜下的細胞數(shù)明顯減少且差異有統(tǒng)計學意義，P＜0.05，SKOV3-neg組、HO-8910-neg組與SKOV3、HO-8910組相比，差異無統(tǒng)計學意義，

10、P＞0.05，提示SKOV3-mimic和HO-8910-mimic細胞的遷移能力顯著被抑制。
　　 5、Westernblotting檢測ZEB1、Vimentin、E-cadherin的相對表達量。SKOV3-mimic和HO-8910-mimic中的ZEB1和Vimentin的表達減少而E-cadherin的表達上調(diào)，與空白對照組相比表達均有顯著差異(P＜0.05);SKOV3-neg和HO-8910-neg的ZEB1、E

11、-cadherin、Vimentin與SKOV3和HO-8910相比均無明顯(P＞0.05)。
　　 6、酶聯(lián)免疫吸附實驗檢測CA125和間皮素的表達。SKOV3-mimic組和HO-8910-mimic組與SKOV3和HO-8910組相比，CA125和間皮素的表達顯著降低(P＜0.05)。SKOV3-neg、HO-8910-neg組與SKOV3、HO-8910組相比，CA125、間皮素的表達無顯著差異（P＞0.05）。

12、　　 結(jié)論:
　　 1、上調(diào)miR200c可以顯著抑制細胞的遷移和侵襲能力，但對細胞的增殖能力無明顯影響。
　　 2、轉(zhuǎn)染miR200cmimic可顯著上調(diào)卵巢癌細胞SKOV3、HO-8910中的miR200c表達，實驗組ZEB1、Vimentin的表達顯著降低，而E-cadherin的表達明顯增高，表明在卵巢癌細胞中可能存在miR200c/ZEB1/E-cadherin調(diào)控機制，miR200c可能通過該通路抑制卵巢癌