microRNA-200c對(duì)ZEB1表達(dá)影響及對(duì)腫瘤細(xì)胞侵襲遷移作用.pdf

1、MicroRNA(miRNA)是近年來新發(fā)現(xiàn)的一類內(nèi)源性非編碼小分子RNA,長(zhǎng)約18.25 m,其序列在物種間具有高度保守性。miRNA通過與靶基因的3’非翻譯區(qū)(3’UTR)上的靶序列結(jié)合抑制靶mRNA的翻譯或降解靶mRNA,發(fā)揮其基因沉默效應(yīng)。研究表明,miRNA參與了真核生物的生長(zhǎng)、發(fā)育、組織分化、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、新陳代謝、疾病及死亡等生理病理過程。miRNA被證明在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中也發(fā)揮了重要作用,其作用的機(jī)制尚不明確。
　

2、　 轉(zhuǎn)錄因子ZEB1(zinc-finger E-box binding homeobox1),又稱為TCF8或δEF1,可以負(fù)調(diào)控多種基因的表達(dá),如IL-2、p73、GATA-3、collagenⅠ/Ⅱ等。ZEBl還可通過抑制E-cadherin的表達(dá)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力。microRNA-200c,屬于microRNA-200家族成員,研究發(fā)現(xiàn)其與ZEB1與microRNA-200c之間可相互抑制,形成負(fù)反饋機(jī)制調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞

3、的侵襲轉(zhuǎn)移能力。
　　 本研究為了驗(yàn)證此負(fù)反饋調(diào)節(jié)機(jī)制是否也在胃癌及其他腫瘤細(xì)胞系中發(fā)揮作用,我們檢測(cè)了幾種腫瘤細(xì)胞系中ZEB1基因的表達(dá)水平與腫瘤細(xì)胞的侵襲遷移能力,分析ZEB1基因的表達(dá)水平與腫瘤細(xì)胞侵襲遷移能力的關(guān)系,并通過在胃癌SGC-7901細(xì)胞中轉(zhuǎn)染microRNA-200c觀察其對(duì)胃癌SGC-7901細(xì)胞生物學(xué)行為的影響,為抑制腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移提供新的思路與方法。本研究分兩部分:
　　 1、選取正常胃黏膜

4、GES-1細(xì)胞,胃癌BGC-823、SGC-7901細(xì)胞、宮頸癌HeLa細(xì)胞及肺癌A549細(xì)胞,Real-time PCR檢測(cè)各細(xì)胞系中ZEB1基因的表達(dá)量,Transwell法檢測(cè)各細(xì)胞系的遷移及侵襲能力,將ZEB1基因的表達(dá)量與各細(xì)胞系的遷移及侵襲數(shù)目做相關(guān)性分析,發(fā)現(xiàn)ZEB1與腫瘤細(xì)胞的遷移及侵襲數(shù)目呈正相關(guān),表明ZEB1與腫瘤細(xì)胞的侵襲及遷移能力有相關(guān)性。
　　 2、利用脂質(zhì)體Lipofectamin2000將人工合成的

5、microRNA-200c轉(zhuǎn)染SGC-7901細(xì)胞,并設(shè)空白轉(zhuǎn)染組及無關(guān)序列轉(zhuǎn)染組,轉(zhuǎn)染24 h后Real-time PCR檢測(cè)各轉(zhuǎn)染組中ZEB1基因的表達(dá)量,Transwell小室法檢測(cè)各轉(zhuǎn)染組細(xì)胞遷移及侵襲能力的變化。結(jié)果表明轉(zhuǎn)染microRNA-200c能明顯抑制了SGC-7901細(xì)胞ZEB1基因的表達(dá)及細(xì)胞遷移和侵襲能力。
　　 以上研究結(jié)果表明,在GES-1、BGC-823、SGC7901、A549及HeLa細(xì)胞系中,