牛Dio3、Dio3os和Wif1基因印記及Wif1基因DNA甲基化狀態(tài)分析.pdf

1、基因組印記是指來(lái)自雙親的等位基因通過(guò)DNA或組蛋白的表觀遺傳修飾而產(chǎn)生的親本等位基因差異表達(dá)的現(xiàn)象。父源等位基因沉默，而母源等位基因表達(dá)的基因稱為父源印記基因;反之，則為母源印記基因。印記基因在染色體上成簇分布且高度保守。目前，在人和小鼠中被鑒定的印記基因總數(shù)超過(guò)200個(gè)，而牛中印記基因的研究相對(duì)較少。
　　本研究選取位于Dlk1-Dio3印記域中在鼠中被鑒定為印記基因的Dio3和Dio3os基因，以及在人胚胎中被鑒定為印記基因的

2、Wif1基因?yàn)檠芯繉?duì)象，通過(guò)RT-PCR方法首先分析了Dio3、Dio3os和Wif1基因在成年奶牛7個(gè)組織中的表達(dá)，結(jié)果表明這3個(gè)基因在成年牛的心、肝、脾、肺、腎、骨骼肌和脂肪組織都表達(dá)。進(jìn)一步應(yīng)用基于SNP(single nucleotide polymorphism)位點(diǎn)的測(cè)序法分析等位基因的表達(dá)。利用PCR產(chǎn)物直接測(cè)序的方法尋找Dio3、Dio3os和Wif1基因的SNP位點(diǎn)，確定雜合子。通過(guò)RT-PCR產(chǎn)物直接測(cè)序法檢測(cè)這三個(gè)

3、基因在雜合子牛的等位基因的特異表達(dá)，發(fā)現(xiàn)Dio3和Dio3os基因在成年牛組織中表現(xiàn)為單等位基因表達(dá)。Wif1基因在肺中表現(xiàn)為單等位基因表達(dá)，在心、肝、脾、腎、肌肉、和脂肪中表現(xiàn)為雙等位基因表達(dá)。
　　為了分析DNA甲基化在調(diào)控Wif1基因組織特異性印記中的可能作用，應(yīng)用亞硫酸氫鹽測(cè)序法分析Wif1基因啟動(dòng)子區(qū)29個(gè)CpG位點(diǎn)在牛單等位基因表達(dá)的肺臟和雙等位基因表達(dá)的肝臟組織中等位基因特異的甲基化狀態(tài)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在肺臟和肝臟中，兩