豬繁殖與呼吸綜合征病毒核衣殼蛋白單克隆抗體的制備與初步應(yīng)用.pdf

1、用豬繁殖與呼吸綜合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndromevirus,PRRSV)核衣殼蛋白基因(ORF7)的昆蟲細(xì)胞表達(dá)產(chǎn)物BacN作為免疫原,腹腔注射免疫BALB/c小鼠;3周后腹腔注射等量抗原進(jìn)行二次免疫;再過2周,加倍劑量腹腔注射進(jìn)行加強(qiáng)免疫,3天后,取小鼠脾細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞SP2/0-Ag-14進(jìn)行融合.經(jīng)間接ELISA進(jìn)行雜交瘤篩選,共獲得3株能針對PRRSV核衣殼蛋

2、白的特異性單克隆抗體(簡稱單抗),分別命名為1F9、5A5和5H8,其亞類分別為IgG1、IgG2b、IgG2b;單抗腹水的間接ELISA效價分別為2<'15>、2<'17>、2<'18>;單抗腹水的間接免疫熒光(Indirect immunofluorescent assay,IIF)效價分別為2<'16>、2<'16>、2<'15>.IIF試驗結(jié)果表明,這3株單抗僅與PRRSV發(fā)生特異性反應(yīng),與常見豬其它病毒如豬細(xì)小病毒、豬偽狂犬病

3、毒、乙型腦炎病毒、豬瘟病毒、口蹄疫病毒、豬圓環(huán)病毒1型以及豬圓環(huán)病毒2型均無反應(yīng)性.Western blot試驗結(jié)果表明,單抗5A5針對PRRSVN蛋白線性表位,而單抗1F9和5H8可能針對PRRSVN蛋白的構(gòu)象型表位,其具體表位還需進(jìn)一步鑒定.由于N蛋白在PRRSV病毒粒子的蛋白成分中含量最多,且編碼N蛋白的基因ORF7比較保守,因此這3株單抗的獲得為PRRS提供了臨床診斷試劑.用所獲得的3株單抗共檢測了7頭臨床疑似PRRS的病死豬,