歐洲黑楊N46組培再生過(guò)程中基因組DNA甲基化變化.pdf

1、DNA甲基化是真核生物中表觀遺傳的主要形式之一，參與多種生命活動(dòng)，在各類生物中廣泛存在。DNA甲基化易受外界環(huán)境條件影響，組織培養(yǎng)過(guò)程產(chǎn)生的DNA是再生植株表型變異的一個(gè)重要來(lái)源。在世界范圍內(nèi)楊樹栽培中，歐洲黑楊具有重要地位。本研究以歐洲黑楊N46為材料，利用毛細(xì)管電泳的MSAP技術(shù)和熒光定量PCR對(duì)其在經(jīng)歷干旱脅迫后再生一代和正常條件下的分化再生5代組培苗的基因組DNA甲基化變化進(jìn)行了研究。取得的結(jié)果如下:
　　1、建立了高效穩(wěn)

2、定的組培再生體系。最佳體系是:歐洲黑楊N46無(wú)性系最適的分化培養(yǎng)基為MS+6-BA0.5 mg·L-1+ NAA0.03 mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+0.5％瓊脂粉，最佳誘導(dǎo)溫度為27℃。最佳的生根培養(yǎng)基為1/2 MS+IBA0.01 mg·L-1+NAA0.01mg·L-1+蔗糖30 g·L-1+0.5％瓊脂粉，最佳生根溫度為25℃。該再生體系為黑楊派樹種快速無(wú)性繁殖及遺傳轉(zhuǎn)化提供了借鑒。
　　2、利用毛細(xì)管電泳的MSA

3、P技術(shù)研究了歐洲黑楊N46經(jīng)歷干旱脅迫后再生一代和正常條件下組培再生5代的組培苗的葉片基因組DNA甲基化變化，共篩選出的17對(duì)選擇性擴(kuò)增引物，均獲得了清晰的擴(kuò)增譜帶，每對(duì)引物組合擴(kuò)增片段20～70條，長(zhǎng)度在50到700 bp之間。共擴(kuò)增出片段725個(gè)。
　　3、MSAP結(jié)果顯示未經(jīng)分化的歐洲黑楊N46原始組培苗G0的總甲基化水平為23.17％，全甲基化水平為16.52％，半甲基化水平為4.76％。經(jīng)歷干旱脅迫和正常條件下分化再生各