干旱脅迫誘導(dǎo)的水稻基因組胞嘧啶甲基化變化.pdf

1、本論文采用15％PEG(聚乙二醇)溶液模擬干旱條件，分別對水稻松前和其漸滲系材料RZ1、RZ2和RZ35進行了不同時間梯度的處理(4小時、1天、6天)。對在該干旱脅迫條件下水稻基因組DNA甲基化狀態(tài)及其變化用MSAP方法進行了分析。利用17對選擇性擴增引物在4種材料分別得到536條、554條、554條、562條帶。我們發(fā)現(xiàn)干旱脅迫引起了水稻基因組DNA甲基化修飾模式的明顯改變。其中變化率最高的為松前4小時處理，變化位點占所檢測甲基化敏感

2、位點的54％，最低為松前6天，占所檢測甲基化敏感位點的10％。但是在干旱脅迫中，不同處理組DNA甲基化變化對干旱脅迫的效應(yīng)時期不同，松前、RZ1、RZ2在4小時變化達到最大值，RZ35呈現(xiàn)明顯的對干旱脅迫應(yīng)答高峰的延遲現(xiàn)象，在24小時(1天)達到最大值。對于考察的三個時間點，處理組DNA甲基化升降具有不同趨勢，即松前、RZ1和RZ2干旱脅迫處理后均出現(xiàn)先升高然后急劇下降，但是RZ35卻表現(xiàn)出逐漸升高然后緩慢降低。RZ35基因組DNA甲基

3、化在干旱脅迫中表現(xiàn)特殊變化規(guī)律，推測其原因是由于基因型不同所導(dǎo)致。根據(jù)MSAP結(jié)果，對15個變化明顯的條帶進行克隆、測序。結(jié)果顯示所測序列全部為一端為EcoR Ⅰ識別位點，一端為HapⅡ/MapⅠ識別位點，即每條帶代表一個甲基化位點?；贐1astN分析，發(fā)現(xiàn)15條片段定位于不同的水稻染色體上。進一步的BlastX分析結(jié)果表明，其中4條帶跟功能基因具有較高的同源性，占總測序序列的26.7％。我們用MSAP分析所得的特異性片段作為探針進行