胃癌的DNA甲基轉(zhuǎn)移酶表達(dá)及基因組DNA甲基化譜.pdf

1、表觀遺傳研究不涉及DNA序列改變的，可隨細(xì)胞分裂而遺傳的基因組修飾作用，包括DNA甲基化(DNA methylation)、組蛋白修飾、染色質(zhì)重塑、基因組印跡等。目前，DNA甲基化是表觀遺傳學(xué)在腫瘤領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。腫瘤細(xì)胞基因組正常DNA甲基化模式異常改變，表現(xiàn)為全基因組廣泛低甲基化及抑癌基因高甲基化。這些異常改變所導(dǎo)致的腫瘤相關(guān)基因功能異?？赡軈⑴c腫瘤發(fā)生與發(fā)展。DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（DNA methyltransferase，DNMT）

2、是催化DNA甲基化修飾的生物酶，其異常表達(dá)可能是腫瘤基因組發(fā)生異常DNA甲基化的原因;特別是DNMT異常高表達(dá)所致的各種抑癌基因異常高甲基化并失活，可能直接參與腫瘤發(fā)生發(fā)展病理生理機(jī)制。5-氮雜-2'-脫氧胞苷是經(jīng)典的DNMT抑制劑，其對(duì)DNMT功能的抑制可能通過逆轉(zhuǎn)抑癌基因高甲基化而抑制腫瘤進(jìn)展。本研究分析胃癌組織及細(xì)胞中各種DNMT表達(dá)特點(diǎn)及DNMT抑制劑對(duì)胃癌細(xì)胞的影響;并分析胃癌組織基因組異常DNA甲基化譜。期望本研究對(duì)胃癌表觀

3、遺傳科研提供參考。
　　第一章胃癌及胃粘膜組織的DNMT蛋白表達(dá)
　　目的:分析胃癌與配對(duì)胃粘膜組織的DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（DNMT，包括DNMT1，DNMT2，DNMT3A，DNMT3B及DNMT3L）表達(dá)特點(diǎn)及差異。
　　方法:采用免疫組織化學(xué)法對(duì)30例胃癌及配對(duì)胃粘膜組織行5種DNMT蛋白表達(dá)研究。
　　結(jié)果:胃癌及配對(duì)胃粘膜組織均表達(dá)各種DNMT蛋白，其中胃粘膜組織增殖活躍區(qū)表達(dá)DNMTs較顯著。胃癌中DNM

4、T3A表達(dá)較配對(duì)胃粘膜組織減弱，余DNMT蛋白(DNMT1，DNMT2，DNMT3B及DNMT3L)在胃癌及胃粘膜的表達(dá)無(wú)顯著差異。彌漫型胃癌的各種DNMT陽(yáng)性表達(dá)率（除DNMT2外）較腸型胃癌增高。
　　結(jié)論:胃癌DNMT蛋白表達(dá)并未較配對(duì)胃粘膜增強(qiáng);胃癌DNMT表達(dá)與Lauren分型相關(guān)。
　　第二章胃癌與胃上皮細(xì)胞DNMT蛋白表達(dá)及5-氮雜-2'-脫氧胞苷對(duì)胃癌細(xì)胞的影響
　　目的:分析胃癌細(xì)胞及胃上皮細(xì)胞的DN

5、MT蛋白表達(dá)及DNMT抑制劑5-氮雜-2'-脫氧胞苷對(duì)胃癌細(xì)胞的影響。
　　方法:采用免疫熒光化學(xué)法及蛋白質(zhì)免疫印跡法分析各種DNMT蛋白在胃癌細(xì)胞MKN-28，SGC-7901及胃上皮細(xì)胞GES-1的表達(dá);采用噻唑蘭比色法及流式細(xì)胞術(shù)分析DNMT抑制劑5-氮雜-2'-脫氧胞苷對(duì)胃癌與胃上皮細(xì)胞增殖率、細(xì)胞周期分布及凋亡率的影響。
　　結(jié)果:胃癌細(xì)胞MKN-28，SGC-7901表達(dá)各種DNMT蛋白，但DNMT1，DNMT3

6、A表達(dá)較弱。DNMT1，DNMT2，DNMT3L蛋白在胃癌細(xì)胞以胞核表達(dá)為主;而DNMT3A，DNMT3B蛋白為胞核胞漿共表達(dá)。各種DNMT蛋白在胃癌細(xì)胞MKN-28，SGC-7901與胃上皮細(xì)胞GES-1間表達(dá)無(wú)顯著差異。單獨(dú)應(yīng)用常規(guī)濃度（0.5-5μmol/L）的5-氮雜-2'-脫氧胞苷在短期內(nèi)（5天）對(duì)胃癌細(xì)胞MKN-28，SGC-7901增值、凋亡或細(xì)胞周期的影響甚小。
　　結(jié)論:胃癌細(xì)胞表達(dá)DNMT蛋白未必較胃上皮細(xì)胞增

7、強(qiáng)。單獨(dú)使用DNMT抑制劑5-氮雜-2'-脫氧胞苷在短期內(nèi)未必影響胃癌細(xì)胞增殖或凋亡。
　　第三章胃癌與胃粘膜組織的基因組DNA甲基化譜
　　目的:分析胃癌與配對(duì)胃粘膜組織的基因組DNA甲基化譜。
　　方法:采用甲基化DNA免疫共沉淀芯片(MeDIP-chip)分析胃癌與配對(duì)胃粘膜組織的基因組DNA甲基化譜差異;采用甲基化DNA免疫共沉淀實(shí)時(shí)定量PCR(MeDIP-qPCR)驗(yàn)證部分MeDIP-chip結(jié)果;采用實(shí)時(shí)定

8、量逆轉(zhuǎn)錄PCR(qRT-PCR)分析胃癌組織中部分異常低甲基化基因(ABL2，F(xiàn)GF18，TRAF2，EGFL7和RAB33A)的轉(zhuǎn)錄。
　　結(jié)果:局部高甲基化及廣泛低甲基化是胃癌與胃粘膜組織基因組DNA甲基化的共同特點(diǎn)。部分基因啟動(dòng)子只在胃癌組織呈高甲基化，但部分基因啟動(dòng)子卻只在胃粘膜組織呈高甲基化。搜尋腫瘤相關(guān)基因后發(fā)現(xiàn)，胃癌組織基因組異常DNA甲基化特征既包括抑癌基因異常高甲基化，又包括癌基因或促癌基因異常低甲基化。MeDI