農(nóng)桿菌介導(dǎo)的百合ACO反義基因轉(zhuǎn)化東方百合‘索邦’的研究.pdf

1、百合是世界著名的球根花卉和鮮切花花卉，在世界花卉市場(chǎng)中占有極其重要的位置。百合作為一種呼吸躍變型花卉，在開花過程中伴隨著乙烯的大量釋放而迅速衰老，如能有效控制百合花期乙烯生成量即可延長(zhǎng)其觀賞壽命，增加百合的觀賞價(jià)值。 本研究以東方百合‘索邦’為材料，利用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將百合ACO反義基因?qū)虢M培苗的鱗莖及葉柄組織。通過GUS基因組織化學(xué)染色、PCR、基于梯狀回收的PCR法及Southern雜交等檢測(cè)方法對(duì)外源基因?qū)肭闆r進(jìn)行鑒

2、定。并對(duì)組培苗進(jìn)行移栽試驗(yàn)。獲得以下研究成果： 1、通過根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將ACO反義基因?qū)霒|方百合‘索邦’。獲得潮霉素抗性植株165株。 2、優(yōu)化了本實(shí)驗(yàn)室建立的根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法的轉(zhuǎn)化百合的遺傳轉(zhuǎn)化體系。外植體不經(jīng)預(yù)培養(yǎng)，侵染時(shí)抽真空1 min，侵染30 min，菌液濃度OD=0.8，共培養(yǎng)7天可獲得1 5.76％的轉(zhuǎn)化率。 3、應(yīng)用GUS基因組織化學(xué)法檢測(cè)、PCR檢測(cè)、基于梯狀膠回收的PCR和Southern

3、雜交等轉(zhuǎn)基因檢測(cè)方法對(duì)轉(zhuǎn)化植株進(jìn)行檢測(cè)。獲得PCR.檢測(cè)陽性植株26株，對(duì)其中4個(gè)植株進(jìn)行了Southern雜交檢測(cè)和1個(gè)植株的PCR-Southem雜交檢測(cè)獲得PCR-Southern陽性植株1株。 4、研究了潮霉素篩選時(shí)間對(duì)農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化的百合植株體內(nèi)外源基因的影響，確定持續(xù)抗生素篩選對(duì)轉(zhuǎn)化植株的作用。 5、對(duì)東方百合‘索邦’組培苗的進(jìn)行煉苗移栽，移栽苗成活率達(dá)92.4％。篩選出較適宜‘索邦’組培苗移栽的基質(zhì)為珍珠