農(nóng)桿菌介導(dǎo)的ACO基因RNA干擾表達(dá)載體轉(zhuǎn)化百合的研究.pdf

1、亞洲系雜種百合是世界最主要的切花品種之一。但與東方百合相比亞洲百合花期更短，嚴(yán)重影響了它的觀賞價值和瓶插壽命，因此培育出花期較長的亞洲百合新品種顯得尤為迫切與重要。已有的研究結(jié)果表明：百合為乙烯釋放型花卉，百合花朵開放時，伴隨著乙烯的釋放而衰老。ACO是催化乙烯生成的最后一步關(guān)鍵酶，控制著乙烯的生成速率。因此，通過RNA干擾技術(shù)可使內(nèi)源的ACO基因轉(zhuǎn)錄的mRNA被降解，對ACO基因進(jìn)行有效沉默，從而抑制乙烯生成，達(dá)到延長花期的目的。

2、 本研究以亞洲百合‘普利安娜’為試材，建立了直接分化受體系統(tǒng)和遺傳轉(zhuǎn)化體系，并通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的ACO基因RNA干擾表達(dá)載體轉(zhuǎn)化亞洲百合，獲得轉(zhuǎn)化植株，為百合遺傳轉(zhuǎn)化提供依據(jù)。本研究取得的主要結(jié)果如下： 1.建立了直接分化受體系統(tǒng)(1)鱗塊和鱗片葉不定芽分化最佳培養(yǎng)基均為MS+BA2.0 mg/L，+NAA0.2 mg/L；(2)小葉柄分化不定芽培養(yǎng)基以MS+BA1.0mg/L，+NAA0.3mg/L為宜；(3)1/2MS+I

3、BA0.5 mg/L，+90g/L蔗糖+暗培養(yǎng)1個月后再光照培養(yǎng)可誘導(dǎo)試管苗鱗莖膨大；(4)生根的適宜培養(yǎng)基為1/2MS+IBA0.5 mg/L，+0.1％活性炭；(5)卡那霉素抗性篩選結(jié)果表明：鱗塊以150 mg/L為宜，鱗片葉以100 mg/L，為宜。 2.建立了遺傳轉(zhuǎn)化體系(1)鱗片葉和鱗塊侵染最佳時間和濃度為：鱗片葉用OD<,600>=0.3左右的菌液侵染8分鐘最好，鱗塊用OD<,600>=0.8左右的菌液侵染30分鐘最