無精子因子及熱休克因子在無、少精癥患者精液、睪丸組織中的缺失研究.pdf

1、目的：通過檢測無、少精癥不育患者睪丸、精液基因組Y染色體上DAZ基因及熱休克轉(zhuǎn)錄因子(HSFY)缺失情況，探討不育癥病因的基因診斷方法。 方法 選擇35例特發(fā)性無、少精癥患者作為研究對象，其中少精癥18例、嚴(yán)重少精癥12例、無精癥5例；10例正常已生育健康男性的睪丸組織作為正常對照。應(yīng)用PCR技術(shù)，檢測睪丸、精液基因組中的Y染色體上特異性序列標(biāo)簽位點(diǎn)(STS)的引物擴(kuò)增了解基因缺失情況。 結(jié)果 實(shí)驗(yàn)組35

2、例標(biāo)本及對照組10例睪丸組織標(biāo)本中均能擴(kuò)增出Y染色體短臂上的性別決定基因(SY14)，說明提取的基因組DNA模板符合實(shí)驗(yàn)的要求．SY14基因擴(kuò)增的片段長度為472bp，將SY14基因做為陽性對照。10例對照組的睪丸組織中均能擴(kuò)增出SY14(SRY)、AZFb/HSFY、AZFc/SY254、AZFc/DAZ-1、AZFc/DAZ-2擴(kuò)增條帶，說明無基因的微缺失。35例不育組中無精子癥3例：嚴(yán)重少精子癥2例(其中一例嚴(yán)重少精子癥和一例無精

3、癥患者為回族)可見SY14(SRY)擴(kuò)增帶，但未見AZFc/SY254 (DAZ)、DAZ-1、DAZ-2擴(kuò)增帶，表明有AZFc/SY254(DAZ)微缺失，其中2例同時(shí)未見AZFb/HSFY擴(kuò)增帶，表明同時(shí)有AZFb/HSFY微缺失；1 例僅有AZFb/HSFY微缺失。為排除假陽性反應(yīng)，對這5例標(biāo)本進(jìn)行3次PCR重復(fù)檢測，上述缺失仍無擴(kuò)增信號，而SY14 (SRY)均能正常擴(kuò)增，證實(shí)AZFb/HFY和AZFc/SY254(DAZ)微缺