人源基因載體phrn介導p53基因在Bel-7402中的抗癌研究.pdf

1、原發(fā)性肝癌(HCC)，簡稱肝癌，是一種高致命性惡性腫瘤。除早期肝癌患者外，絕大多數肝癌患者存活期不超過1年。常規(guī)治療方法除對部分早期肝癌患者有效外，對絕大多少中晚期肝癌患者療效甚微。腫瘤基因治療作為一種新的治療理念，一經出現就引起研究人員的高度重視。 目的：安全、高效、靶向性好的載體是腫瘤基因治療的關鍵。本研究利用人源基因載體結合人巨細胞病毒增強子(CMVe)，人端粒酶逆轉錄酶啟動子(hTERTp)及腫瘤抑制基因p53構建腫瘤抑

2、制載體，研究他們在肝癌細胞株Bel-7402中的功能。 方法：我們將CMVe與腫瘤特異性啟動子hTERTp組合，分別結合GFP及精氨酸型和脯氨酸型腫瘤抑制基因p53，構建GFP表達載體pchEGFP以及p53表達載體pchp53<,Arg>和pchp53<,pro>；脂質體2000轉染肝癌細胞株Bel-7402；24 h后利用熒光顯微鏡以及流式細胞儀檢測GFP的表達；RT-PCR、Western blotting檢測p53基因的

3、表達；利用HOECHST 33258、ANNEXIN V-FITC/PI染色，檢測p53在腫瘤細胞的促凋亡情況。 結果：GFP熒光表達載體在Bel-7402細胞中能有效表達；RT-PCR及Western blot檢測到精氨酸型和脯氨酸型p53基因在Bel-7402細胞內表達；HOECHST33258染色及ANNEXIN V/PI染色檢測細胞凋亡實驗沒有得到明顯的細胞調亡結果。 結論：本實驗構建的腫瘤抑制載體在肝癌細胞Be