沙眼衣原體臨床株體外藥物敏感性與耐藥機制的研究.pdf

1、目的：收集并分離泌尿生殖道沙眼衣原體感染臨床治療失敗患者的衣原體臨床株，通過研究其體外藥物敏感性和耐藥的分子生物學機制，以及與藥物臨床療效的相關性，了解本地區(qū)沙眼衣原體野生株的耐藥情況，建立脫離細胞培養(yǎng)、操作性強的藥物敏感性檢測方法，為沙眼衣原體感染的合理治療和衣原體感染傳播的有效控制奠定基礎。 方法：采集237例泌尿生殖道沙眼衣原體感染臨床治療失敗患者的尿道/宮頸脫落細胞標本，其中男性190例，女性47例。標本接種于致密單層的

2、McCoy細胞。將培養(yǎng)分離的陽性標本傳代增殖至感染率超過90％，然后將一定濃度的衣原體接種在含有不同濃度、不同種類抗菌素(紅霉素、克拉霉素、阿奇霉素、四環(huán)素、多西環(huán)素、米諾壞素、左氧氟沙星、莫西沙星、司帕沙星、利福平)的培養(yǎng)液中，培養(yǎng)48小時，碘染色觀察包涵體生長的抑制情況，通過該藥對沙眼衣原體的最低抑菌濃度，確定沙眼衣原體的藥物敏感性。核酸擴增臨床分離株的omp1基因并以AluI、MspI雙酶切進行基因分型。同時核酸擴增檢測沙眼衣原體

3、菌株中是否含有抗四環(huán)素基因M(tetM)；擴增23S核蛋白體RNA、gyrA、rpoB基因后，分別通過擴增產物基因測序、限制性片段多態(tài)性分析和單鏈構象多態(tài)性分析，檢測沙眼衣原體臨床株的基因突變情況。 結果：237例患者的泌尿生殖道標本接種后，獲得82株培養(yǎng)陽性的沙眼衣原體臨床分離株，分離陽性率為34.60％。其中52株傳代后感染率超過90％，進行體外藥敏試驗，最終發(fā)現(xiàn)紅霉素耐藥株13株，未檢測到其他抗菌素耐藥株。將該52株臨床株

4、和4株臨床分離株進行基因分型，結果發(fā)現(xiàn)E型53株，G型2株、J型1株。完成了8株耐藥株23SrRNA擴增產物測序，結果均無A2058C突變，均有A2131T突變，其中3株有T2611C突變。69株臨床株中59株檢測tetM陽性，10株陰性。71株臨床株的gyrA擴增產物Tsp509I酶切圖譜均無Ser83→IIe突變。58株臨床株rpoB擴增產物的單鏈構象多態(tài)性分析未發(fā)現(xiàn)突變株。 結論：泌尿生殖道沙眼衣原體對各類抗菌素的敏感性存

5、在不同程度的降低。常用藥物的敏感性變化相對明顯，紅霉素臨床耐藥株已經達到25％。紅霉素耐藥株僅少數有報道的T2611C突變。本研究發(fā)現(xiàn)的A2131T突變未見報道。tetM基因陽性率(85.51％)較高，表明體內對四環(huán)素普遍敏感性降低。喹諾酮類和利福平實驗室突變株可能在臨床株中并不常見。沙眼衣原體的耐藥機制十分復雜，仍然需要進一步研究。E型為沙眼衣原體的優(yōu)勢基因型。以細胞培養(yǎng)為基礎的體外藥敏試驗與臨床療效之間并不完全相關，因此只適于臨床不