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文檔簡介
1、大量的臨床調查顯示,膳食中缺鈣是引起高血壓的一個重要因素。許多干預試驗證實,補充鈣可使某些血壓正常者和高血壓受試者的血壓在短期內輕微下降。對其機制研究表明高血壓病(EHT)患者存在多種細胞膜鈣轉運缺陷,最終導致高細胞游離鈣;它可以通過興奮-收縮、興奮-代謝“偶聯(lián)”,增高平滑肌張力和血管阻力,從而血壓升高、血管損傷。 目前的研究表明,高鈣飲食可以延緩由L—NAIMIE引起的高血壓的發(fā)展,膳食鈣對一氧化氮缺乏型高血壓大鼠的降壓機制在
2、于增加動脈血管平滑肌細胞超極化和對NO的敏感性,以及減少過氧化物和縮血管物質前列腺素的生成。膳食鈣通過NO降壓是一條很重要的機制,涉及環(huán)節(jié)較多,其可能的機制可以概括如下:膳食鈣可以提高GTPCH-1活性,從而促進BH4合成,提高NOS的活性,最終促進NO生物合成。但膳食鈣是如何提高GTPCH-1活性的機制,還有待進一步研究。 本實驗以一氧化氮缺乏型高血壓大鼠為研究對象,通過觀察大鼠血壓、血清NO濃度、NOS活性、BH4水平、主動
3、脈GTPCH-1,GFRP Mrna表達的變化,研究膳食鈣通過NO降壓的可能機制。 實驗方法 實驗分兩部分實施:第一部分于2005-10-22至2006-01-13在解放軍第四軍醫(yī)大學動物實驗室及形態(tài)學實驗室完成。取健康11周齡雄性SD大鼠24只,大鼠適應性飼養(yǎng)2周,此期間均給予基礎飼料,喂養(yǎng)飼養(yǎng)溫度22℃,自由進食飲水。然后按體重區(qū)組隨機分成4組,每組6只,分別是對照組:基礎飼料喂養(yǎng),從實驗開始到第6周末將40mg/(
4、kg.d)去離子水灌胃,從第7周開始停止去離子水灌胃。 第一組:從實驗開始到第6周末給予5.0%(w/w)的高鈣膳食和40 mg/(kg.d)去離子水灌胃,從第7周開始停止去離子水灌胃。第二組:從實驗開始到第6周末將40mg,(kg.d)L—NAME;容于去離子水中灌胃;其間飼以基礎飼料。從第7周開始停止L—NANE灌胃,開始給予5.0%(w/w)的高鈣膳食。第三組:從實驗開始到第6周末將40mg/(kg.d)L—NAME;容于
5、去離子水中灌胃,從第7周開始停止L—NAME灌胃,基礎飼料喂養(yǎng),所有實驗大鼠飼養(yǎng)期間均飲用去離子水。每天早晨8:30喂食一次,晚上19:00點灌胃,并自由飲水,每天12h光照周期應用RBP-1型大鼠血壓儀測量血壓,10周后處死所有大鼠,硝酸還原酶法檢測血清中一氧化氮的濃度和一氧化氮合酶活性。 第二部分于2006-3-30至2006-08-17進行。再取健康11周齡雄性SD大鼠40只,大鼠適應性飼養(yǎng)2周,此期間均給予基礎飼料,喂養(yǎng)
6、飼養(yǎng)溫度22℃,自由進食飲水。然后按體重區(qū)組隨機分成5組,每組8只,分別為第一組:從實驗開始到第6周末給予5.0%(w/w)的高鈣膳食和40 rag/(kg.d)L-NAME溶于去離子水中灌胃,從第7周開始停止L—NAME灌胃。 第二組:從實驗開始到第6周末將40mg,(kg.d)L—NAME;容于去離子水中灌胃;其間飼以基礎飼料。從第7周開始停止L—NAME灌胃,開始給予5.0%(w/w)的高鈣膳食。 第三組:基礎飼料
7、+L—NAME,從實驗開始到第6周末將40mg,(kg.d)L—NAME溶于去離子水中灌胃,從第7周開始停止L—NAME灌胃。對照組:基礎飼料喂養(yǎng),從實驗開始到第6周末將40mg,(kg.d)去離子水灌胃,從第7周開始停止去離子水灌胃。 第四組:從實驗開始到第6周末給予5.0%(w/w)的高鈣膳食和40 mg/(kg.d)去離子水灌胃,從第7周開始停止去離子水灌胃。所有實驗大鼠飼養(yǎng)期間均飲用去離子水。每天早晨8:30喂食一次,晚
8、上19:00點灌胃,并自由飲水,每天12h光照周期。每周應用RBP-1型大鼠血壓儀測量血壓,10周后處死所有大鼠。BH4標準品購自美國Sigma公司。一步法RT-PCR試劑盒購自invitrogen公司。10周后處死所有大鼠。應用HPLC測定BH4水平及采用逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR))方法測定大鼠主動脈GTPCH-1和GFRP Mrna的表達水平。 實驗結果 (1)血壓:從實驗第4周開始第二組和第三組明顯高于對照
9、組和第一組(P<0.01),從第7周到第10周實驗結束時,第三組血壓明顯高于其他3組(P<0.01)。 (2)血清一氧化氮濃度:對照NI'~-于第一組和第二組[(8 81±6 63),(14.80±5.32),(15.26±3.55)μmo1/L,P<0.05],但高于第三組[(2.89±1.71)μmo1/L,P<0.05];第一組和第二組比較差異不顯著(P>0.05);第二組則高于第三(P<0.05)。 (3)血清一
10、氧化氮合酶活性:對照組低于第一組和第二組[(334.57±74.35),(436.09±69.35),(448.76±45.68)μkat/L,P<0.05],但高于第三組[(255.88±35.17)μtkat/L,P<0.05];第一組和第二組比較差異不顯著(P>0.05);第二組則高于第三(P<0.05)。 (4)BH4:第一組和第二組BH4水平明顯低于對照組和第四組(P<0.01),第三組BH4水平顯著低于其他4組(P<
11、0.01)。 (5)GTPCH-1:第一組和第二組GTPCH-1 Mrna的水平表達明顯低于對照組和第四組(P<0.05),第三組GTPCH-1 Mrna的水平表達顯著低于其他4組(P<0.05)。 (6)GFRP:第一組和第二組GFRP Mrna的水平表達明顯高于對照組和第四組(P<0.05),第三組GFRP Mrna的水平表達顯著高于其他4組(P<0.05)。 實驗結論 (1)膳食鈣能夠降低一氧化氮缺
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