鹿茸中有效成分的提取與分離關(guān)鍵技術(shù)及其抗氧化活性的研究.pdf

1、鹿茸為鹿科動(dòng)物梅花鹿或馬鹿的雄鹿密生茸毛的未骨化的幼角，是傳統(tǒng)名貴中藥，具有溫腎壯陽(yáng)、益精補(bǔ)血、強(qiáng)健筋骨等功效。藥物分析表明，鹿茸中含有多種具有重要生理活性的物質(zhì)，其中含有的雌激素、孕酮等對(duì)女性更年期綜合癥有預(yù)防和治療作用；次黃嘌呤、尿嘧啶、膽固醇、對(duì)羥基苯甲醛等具有抑制單胺氧化酶的抗衰老作用；胰島素樣生長(zhǎng)因子-1(IGF-1)是生長(zhǎng)調(diào)節(jié)素的一種，無(wú)論是在活體內(nèi)還是對(duì)離體培養(yǎng)的組織和細(xì)胞均能表現(xiàn)出一定的生物學(xué)功能，主要對(duì)糖尿病及其并發(fā)癥

2、等有著特殊的療效。
　　 傳統(tǒng)的加工方法得到的鹿茸產(chǎn)品加工方式粗放落后，易使鹿茸中的一些活性成分損失而得不到充分利用。因此，采用先進(jìn)分離技術(shù)對(duì)鹿茸中的有效成分進(jìn)行提取、分離及其活性分析，對(duì)科學(xué)地利用中國(guó)的珍貴中藥鹿茸資源，提高其附加值及促進(jìn)中藥現(xiàn)代化具有重要意義。
　　 本文對(duì)建立鹿茸中的性激素和生物堿基(尿嘧啶、次黃嘌呤和尿苷)的分析方法進(jìn)行了研究。選擇甲醇作為最佳提取溶劑，優(yōu)化了熱回流提取條件，并利用放射免疫法對(duì)鹿茸

3、中的雌二醇和孕酮進(jìn)行了定量分析。同時(shí)，建立了快速測(cè)定鹿茸中生物堿基成分的HPLC方法，方法學(xué)研究結(jié)果表明，在最佳色譜條件下，尿嘧啶、次黃嘌呤和尿苷分離度好，具有良好的精密度和重現(xiàn)性，平均加樣回收率在98.39％～103.4％范圍內(nèi)。利用建立的上述方法對(duì)鹿茸中的性激素和生物堿基成分分別進(jìn)行了含量測(cè)定，從而為后面的回收率計(jì)算提供數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。
　　 在對(duì)鹿茸中的有效成分進(jìn)行提取、分離研究過(guò)程中，本文首先利用超臨界CO2結(jié)合共溶劑萃取技術(shù)

4、提取鹿茸中的性激素成分，考察了乙醇濃度、夾帶劑流速、萃取溫度、萃取壓力和萃取時(shí)間對(duì)雌二醇、孕酮提取率和含量的影響，得到了優(yōu)化的超臨界萃取條件。然后采用超聲強(qiáng)化萃取技術(shù)對(duì)鹿茸的超臨界萃余物中的IGF-1成分進(jìn)行了提取研究，考察了溶劑的pH、溶劑用量、提取溫度、提取時(shí)間等對(duì)鹿茸的超臨界萃余物中的IGF-1提取率的影響，同時(shí)還考察了超臨界萃取條件對(duì)萃余物中IGF-1活性保留率的影響，從而確定了最佳的綜合提取工藝條件。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：以75％乙醇

5、作為夾帶劑，夾帶劑流速為2.0mL/min，萃取壓力為30MPa，萃取溫度35℃、萃取時(shí)間30min，二氧化碳用量為15L/g的條件下，孕酮和雌二醇的回收率均高于88％，其中孕酮的回收率是熱回流提取的1.9倍；雌二醇的回收率是熱回流提取的1.5倍。其溶劑消耗僅是熱回流提取消耗的1/6。同時(shí)萃余物中得到的IGF-1的活性保留率為93.68％。此外，本文還對(duì)超聲強(qiáng)化萃取法得到的鹿茸提取液中所含蛋白質(zhì)、氨基酸及酸性多糖等多種成分進(jìn)行了定量分析

6、。
　　 對(duì)超臨界萃取物進(jìn)行定性定量分析的結(jié)果表明，萃取物中除含有性激素、生物堿基、對(duì)羥基苯甲醛、磷脂等生物活性物質(zhì)外，還含有較高含量的膽固醇成分，如果將其開(kāi)發(fā)成具有一定功效的保健品或藥品，可能會(huì)由于其中的高膽固醇含量而對(duì)人體的健康產(chǎn)生一定的影響。因此，本文采用單因素實(shí)驗(yàn)，考察了β-環(huán)糊精飽和溶液用量與萃取物質(zhì)量比、包合溫度、包合時(shí)間和萃取物的水稀釋濃度等對(duì)鹿茸的超臨界提取物中膽固醇脫除率的影響，確定了β-CD飽和水溶液包合法脫

7、除鹿茸超臨界萃取物中膽固醇的最佳條件。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在最佳工藝條件下，鹿茸超臨界萃取物中膽固醇脫除率為91.64％，尿嘧啶、次黃嘌呤和尿苷三種生物堿基成分保留率分別為77.31％，82.58％，85.19％，雌二醇保留率達(dá)到90.30％，孕酮保留率為46.69％。
　　 為了研究鹿茸超臨界提取物的體外抗氧化活性，本文通過(guò)以卵磷脂為模型的脂質(zhì)體系，鄰二氮菲-Fe2+體系產(chǎn)生的羥基自由基體系，脫氧核糖-鐵體系產(chǎn)生的羥基自由基體系三個(gè)

8、方面來(lái)進(jìn)行了考察，并與維生素C溶液，鹿茸75％乙醇和甲醇回流提取物抗氧化活性進(jìn)行比較。結(jié)果表明，三種鹿茸提取物均有一定的抗脂質(zhì)和自由基氧化的作用，而且呈現(xiàn)一定的劑量效應(yīng)關(guān)系，鹿茸超臨界提取物的抗氧化活性明顯高于鹿茸回流提取物和維生素C溶液。該研究為探討鹿茸提取物抗衰老作用機(jī)理提供數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。
　　 尿嘧啶是鹿茸提取物中對(duì)單胺氧化酶起抑制作用的主要成分之一。本文利用動(dòng)態(tài)法實(shí)驗(yàn)在溫度為308.15K～308.15K和壓力為15MPa～

9、40MPa范圍內(nèi)測(cè)定了尿嘧啶在超臨界CO2中的溶解度，考察了溫度和壓力對(duì)溶解度的影響，并對(duì)尿嘧啶的溶解度實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行了關(guān)聯(lián)。分別利用經(jīng)驗(yàn)方程(Gordillo方程、Abolghasem方程)，基于稀釋溶液理論的M-S-T方程和修飾的Ziger-Eckert方程對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行了關(guān)聯(lián)，結(jié)果表明，這四個(gè)關(guān)聯(lián)方程中，五參數(shù)Gordillo方程的關(guān)聯(lián)誤差較小，AARD為9.8％；而三參數(shù)修飾的Ziger-Eckert方程則由于方程中的溶解度參數(shù)需

10、要基團(tuán)貢獻(xiàn)法進(jìn)行估算，而產(chǎn)生較大的關(guān)聯(lián)誤差。又分別利用從締合理論概念出發(fā)的Chrastil方程、修正的Chrastil方程以及溶劑一溶質(zhì)團(tuán)簇方程對(duì)尿嘧啶在超臨界CO2中的溶解度進(jìn)行了關(guān)聯(lián)，結(jié)果表明，修正的Chrastil方程的AARD為10.1％，關(guān)聯(lián)結(jié)果與Gordillo方程相當(dāng)而優(yōu)于Chrastil方程；而溶劑一溶質(zhì)團(tuán)簇方程計(jì)算結(jié)果與實(shí)驗(yàn)結(jié)果誤差較大。本文還通過(guò)無(wú)因次量綱的引入建立了無(wú)因次新締合方程，此方程具有七個(gè)可調(diào)參數(shù)，關(guān)聯(lián)結(jié)果