酒精性肝硬化中醫(yī)證候?qū)W特點(diǎn)和赤芍對(duì)HSC增殖和凋亡的影響.pdf

1、中醫(yī)藥在防治酒精性肝病方面具有潛在的優(yōu)勢(shì)和鮮明的特點(diǎn)，本研究運(yùn)用臨床流行病學(xué)的方法和原則，探討酒精性肝硬化的中醫(yī)證候特點(diǎn)，為臨床更好地防治酒精性肝硬化做有益的嘗試。酒精性肝纖維化是肝硬化發(fā)展的必經(jīng)過程，由于具有可逆性，故研究肝纖維化的形成機(jī)制是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)之一。酒精性肝纖維化是以肝星狀細(xì)胞(HSC)為主的細(xì)胞激活增殖，使細(xì)胞外基質(zhì)各成分合成明顯增多，降解相對(duì)減少的動(dòng)態(tài)可逆病理過程。本課題運(yùn)用細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)技術(shù)在兩個(gè)層面上研究赤

2、芍水提物抗酒精性肝纖維化的細(xì)胞與分子機(jī)制。 本課題由理論研究、臨床研究及實(shí)驗(yàn)研究三部分組成： 理論研究部分，一部分內(nèi)容總結(jié)了中醫(yī)對(duì)酒精性肝病病因病機(jī)的認(rèn)識(shí)，對(duì)當(dāng)前國(guó)內(nèi)有關(guān)中藥方劑和有效成分治療酒精性肝病以及酒精性肝病流行病學(xué)的研究進(jìn)展進(jìn)行了綜述；另一部分系統(tǒng)論述了酒精性肝纖維化形成機(jī)制的研究成果。 臨床研究部分，為多中心前瞻性研究。以符合臨床流行病學(xué)要求的全國(guó)6家醫(yī)院病例資料為基礎(chǔ)，對(duì)酒精性肝硬化患者的臨床資料進(jìn)

3、行調(diào)查，探討酒精性肝硬化患者中醫(yī)證候分布的特點(diǎn)；應(yīng)用因子分析的方法，研究了100例酒精性肝硬化患者中醫(yī)證候特點(diǎn)的分布，發(fā)病的特點(diǎn)。 實(shí)驗(yàn)研究部分，主要進(jìn)行了離體實(shí)驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)以肝星狀細(xì)胞為靶細(xì)胞，以乙醛為刺激因子，研究灌服赤芍水提物后犬血清對(duì)肝星狀細(xì)胞HSC一T6增殖抑制及促凋亡作用的影響，同時(shí)通過觀察藥物對(duì)細(xì)胞基因蛋白表達(dá)的變化，探討該藥抗酒精性肝纖維化的作用機(jī)理。 研究結(jié)果： (1)臨床研究： 實(shí)驗(yàn)一：

4、男性為主要的飲酒和酒精性肝硬化患病人群；酒精性肝硬化的發(fā)病高峰年齡在50歲左右。不同職業(yè)人群酒精性肝硬化發(fā)生率有所不同，干部、商人最高，分別為32％和38％；日飲酒量160g/d，飲酒年限20年，累計(jì)酒精攝入量1500kg左右時(shí)，具有較高的患病率。酒精性肝硬化患者中谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(Y—GT)值(100～250U/L)、AST/ALT比值>2、堿性磷酸酶(ALP)值(220～550U/L)、總膽紅素(TBIL)(>51umol/1)、白蛋白

5、(ALB)(<28g/1)、凝血酶原百分活動(dòng)度PTA(50％～70％)的出現(xiàn)率較高。 實(shí)驗(yàn)二：酒精性肝硬化患者中醫(yī)證候特點(diǎn)為虛實(shí)夾雜；中醫(yī)病位主要在肝膽脾腎；病機(jī)主要為氣滯、血瘀、濕(熱)濁內(nèi)蘊(yùn)，兼有肝腎陰虛，脾腎陽虛。Y—GT、AST/ALT比值、ALB、PTA、Child—pugh分級(jí)對(duì)酒精性肝硬化患者中醫(yī)證候特點(diǎn)的分布有顯著性的影響。 (2)實(shí)驗(yàn)研究： 實(shí)驗(yàn)一：MTT法分別檢測(cè)乙醛濃度在17.5μM～375

6、 mM對(duì)HSC—T6的存活率和增殖率，結(jié)果表明乙醛濃度在17.5μM～3.5mM可明顯促進(jìn)HSC—T6的增殖，并確定乙醛濃度在87.5μM建立了大鼠酒精性肝纖維化離體HSC模型。 實(shí)驗(yàn)二：乙醛造模后肝星狀細(xì)胞HSC—T6為體外模型，以赤芍水提取物給彼格犬一次性灌胃，取給藥前的血清及給藥后不同時(shí)間點(diǎn)的血清作為實(shí)驗(yàn)藥物血清。以四甲基固氮唑鹽(MTT)法分別檢測(cè)每個(gè)采血時(shí)間點(diǎn)含藥血清對(duì)HSC—T6作用72h后的抑制情況，找出最佳含藥血

7、清時(shí)點(diǎn)。結(jié)果表明，2h和3h時(shí)點(diǎn)藥物血清對(duì)HSC—T6細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率最高，分別達(dá)到79.8％，77.9％。 實(shí)驗(yàn)三：以流式細(xì)胞儀分別檢測(cè)給藥后2h，3h藥物血清對(duì)HSC—T6作用72h后的促凋亡作用。PI染色流式細(xì)胞分析：2h和3h時(shí)點(diǎn)藥物血清作用HSC—T6，細(xì)胞在G0/G1，APOP期比例較模型組明顯上升，S期比例明顯下降。 實(shí)驗(yàn)四：給藥后2h的血清作為實(shí)驗(yàn)藥物血清。以免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)藥物血清對(duì)HSC—T6作用7

8、2h后Bc1-2、Bax、Caspase-3三種基因蛋白表達(dá)情況。結(jié)果表明，乙醛造模后的HSC—T6中Bc1-2的基因蛋白表達(dá)較正常培養(yǎng)組增加，Bax、Caspase-3表達(dá)降低；藥物血清作用后的HSC—T6中Bc1-2的基因蛋白表達(dá)較造模組顯著降低，Bax、Caspase-3的表達(dá)較造模組顯著增加。 結(jié)論： 酒精性肝硬化患者多發(fā)于男性，年齡在50歲左右，干部或商人居多；日飲酒量160g/d，飲酒年限20年，累計(jì)酒精攝入