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文檔簡介
1、傷寒是一種急性全身性感染,每年全球傷寒(包括副傷寒)患者約2200萬,死亡超過20萬人。傷寒包括傷寒沙門氏菌(Salmonella typhi)引起的傷寒和甲、乙、丙型副傷寒沙門氏菌 (Salmonella paratyphi A,B and C)引起的副傷寒。近年來我國甲型副傷寒的發(fā)病率呈逐年上升趨勢,研究出安全、高效、經(jīng)濟的疫苗,對于預防甲型副傷寒爆發(fā)具有重大的經(jīng)濟社會效益。 甲型副傷寒沙門氏菌是無莢膜的革蘭氏陰性菌,其外膜
2、蛋白在致病和刺激機體免疫應答方面起著非常重要的作用。因此,在研究和開發(fā)疫苗中,病原體的外膜蛋白成為熱點。 本論文對甲型副傷寒沙門氏菌外膜蛋白的克隆表達及其免疫保護性進行了研究,目的在于探索應用甲型副傷寒沙門氏菌外膜蛋白作為保護性抗原,獲得甲型副傷寒候選疫苗的可能性。 本課題選擇毒力較強的甲型副傷寒沙門氏菌 50973 做為實驗菌株,以NmpC、MipA、OmpW、PagC、OmpX、PomP(GI:56412276)、O
3、mpC、FadL、TolC、BtuB和Imp等11個外膜蛋白為目標蛋白,分別將其基因的PCR擴增片段克隆到pET-32a表達載體,篩選出陽性克隆,用IPTG作為誘導劑,實現(xiàn)了這11種目標外膜蛋白的過量表達。利用這些過表達目標蛋白在鹽溶液中形成沉淀而在水中可溶的特性實現(xiàn)了目標蛋白的有效分離。采用腹腔注射和體內(nèi)攻毒的方法對純化好的外膜蛋白的免疫保護性進行了研究,結(jié)果表明,PagC、OmpX、NmpC、FadL、TolC和BtuB等6個外膜蛋
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