甲型副傷寒沙門氏菌外膜蛋白的表達(dá)及其免疫保護(hù)性研究.pdf

1、傷寒是一種急性全身性感染，每年全球傷寒(包括副傷寒)患者約2200萬(wàn)，死亡超過(guò)20萬(wàn)人。傷寒包括傷寒沙門氏菌(Salmonella typhi)引起的傷寒和甲、乙、丙型副傷寒沙門氏菌 (Salmonella paratyphi A，B and C)引起的副傷寒。近年來(lái)我國(guó)甲型副傷寒的發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)，研究出安全、高效、經(jīng)濟(jì)的疫苗，對(duì)于預(yù)防甲型副傷寒爆發(fā)具有重大的經(jīng)濟(jì)社會(huì)效益。 甲型副傷寒沙門氏菌是無(wú)莢膜的革蘭氏陰性菌，其外膜

2、蛋白在致病和刺激機(jī)體免疫應(yīng)答方面起著非常重要的作用。因此，在研究和開發(fā)疫苗中，病原體的外膜蛋白成為熱點(diǎn)。 本論文對(duì)甲型副傷寒沙門氏菌外膜蛋白的克隆表達(dá)及其免疫保護(hù)性進(jìn)行了研究，目的在于探索應(yīng)用甲型副傷寒沙門氏菌外膜蛋白作為保護(hù)性抗原，獲得甲型副傷寒候選疫苗的可能性。 本課題選擇毒力較強(qiáng)的甲型副傷寒沙門氏菌 50973 做為實(shí)驗(yàn)菌株，以NmpC、MipA、OmpW、PagC、OmpX、PomP(GI：56412276)、O

3、mpC、FadL、TolC、BtuB和Imp等11個(gè)外膜蛋白為目標(biāo)蛋白，分別將其基因的PCR擴(kuò)增片段克隆到pET-32a表達(dá)載體，篩選出陽(yáng)性克隆，用IPTG作為誘導(dǎo)劑，實(shí)現(xiàn)了這11種目標(biāo)外膜蛋白的過(guò)量表達(dá)。利用這些過(guò)表達(dá)目標(biāo)蛋白在鹽溶液中形成沉淀而在水中可溶的特性實(shí)現(xiàn)了目標(biāo)蛋白的有效分離。采用腹腔注射和體內(nèi)攻毒的方法對(duì)純化好的外膜蛋白的免疫保護(hù)性進(jìn)行了研究，結(jié)果表明，PagC、OmpX、NmpC、FadL、TolC和BtuB等6個(gè)外膜蛋