甲型副傷寒沙門菌h1A-spaO融合基因構(gòu)建及其表達(dá)產(chǎn)物免疫保護(hù)作用.pdf_第1頁(yè)
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1、目的：構(gòu)建甲型副傷寒沙門菌h1a-spaO融合基因及其原核表達(dá)系統(tǒng)，確定重組表達(dá)產(chǎn)物rH1a-SpaO免疫保護(hù)作用。
　　方法：采用柔性肽序列連接引物PCR構(gòu)建并擴(kuò)增h1a與spaO基因的融合基因h1a-spaO，T-A克隆后測(cè)序。采用常規(guī)基因工程方法構(gòu)建h1a-spaO融合基因原核表達(dá)系統(tǒng)，SDS-PAGE檢測(cè)rH1 a-SpaO表達(dá)情況。采用Western Blot鑒定rH1a-SpaO抗原性和免疫反應(yīng)性，微量肥達(dá)試驗(yàn)確定rH

2、1a-SpaO抗血清凝集甲型副傷寒沙門菌的能力。采用小鼠感染模型了解rH1a-SpaO對(duì)甲型副傷寒沙門菌致死性感染的保護(hù)作用并與等量單一重組表達(dá)蛋白H1a(rH1a)及SpaO(rSpaO)比較。
　　結(jié)果：所構(gòu)建的h1a-spaO融合基因與單一h1a或spaO基因核苷酸和氨基酸序列相似性均為100％。h1a-spaO融合基因原核表達(dá)系統(tǒng)能高效表達(dá)rH1a-SpaO。rH1a-SpaO能與rH1a或rSpaO抗血清結(jié)合， rH1a

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