拓撲異構(gòu)酶Ⅰ抑制劑對膀胱腫瘤細胞抑制作用的機理研究.pdf

1、我們設計該課題,對喜樹堿(camptothecin,CPT)誘導人膀胱癌細胞凋亡的作用進行了研究,并初步探討了喜樹堿誘導膀胱癌細胞系凋亡的途徑和機理,以及Bax對該途徑的調(diào)控作用,以期對Topo Ⅰ抑制劑對膀胱癌抑制作用的機理有更深入的認識,為今后臨床中進一步提高膀胱癌治療效果和尋求療效更佳的化療藥物提供相應的理論依據(jù).首先,我們對體外培養(yǎng)的膀胱癌RT4和MGH細胞用RPMI-1640進行常規(guī)培養(yǎng),當細胞培養(yǎng)至密度為60％~80％時,加

2、入濃度分別為50nM及500nM的CPT,分時段收集細胞,用FACScan流式細胞儀分析細胞凋亡的發(fā)生及不同時段細胞凋亡率變化,用蛋白免疫印跡方法檢測CPT處理后不同時間段,Bcl-2基因家族的兩個重要蛋白Bcl-2與Bax蛋白水平的變化,以及細胞凋亡的幾個重要執(zhí)行蛋白天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶3和多聚腺苷二磷酸核糖聚合物酶的活性的改變.在第一部分研究中我們觀察到CPT處理體外培養(yǎng)的膀胱癌細胞后有Caspase-9的活化提示線粒體途徑

3、可能參與了CPT誘導的膀胱癌細胞凋亡,因此在接下來的實驗中,我們?nèi)砸园螂装㏑T4和MGH細胞為體外模型,于培養(yǎng)基中加入濃度為500nM的CPT后,分時段收集細胞,用FACScan流式細胞儀分析細胞凋亡的發(fā)生及變化,并檢測細胞內(nèi)線粒體膜電位的改變,用亞細胞組分分離技術和蛋白免疫印跡方法分離并檢測CPT處理后,細胞質(zhì)內(nèi)和線粒體內(nèi)細胞色素C水平的變化.綜合以上各部分實驗的結(jié)果,我們可以得出以下結(jié)論:①DNA拓撲異構(gòu)酶Ⅰ抑制劑對膀胱癌細胞RT4