左金丸抗幽門螺桿菌藥效物質(zhì)篩選及其現(xiàn)代制劑研究.pdf

1、中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)一直是當(dāng)今中醫(yī)藥研究的熱點和難點。中醫(yī)藥理論認為，炮制和配伍可不同程度地改變中藥的藥性，即活性。為了尋求中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究的新突破，本文在中醫(yī)藥理論的指導(dǎo)下，以黃連不同炮制品以及主含黃連的左金丸及其經(jīng)典類方為研究對象，主要采用生物熱動力學(xué)方法，同時結(jié)合常規(guī)藥理試驗驗證和化學(xué)組分關(guān)聯(lián)分析，從復(fù)方組成、炮制規(guī)格、有效部位三個層面，較系統(tǒng)地考察左金丸抗幽門螺桿菌等藥效物質(zhì)基礎(chǔ)；開展基于復(fù)方有效部位的左金漂浮片制備工藝研究；在

2、此基礎(chǔ)上，探索構(gòu)建一套主要基于生物熱動力學(xué)表達的清熱類中藥藥效物質(zhì)篩選模式和方法。主要研究結(jié)果如下： 1．生物熱動力學(xué)分析的方法學(xué)考察：用安瓿法測定的細菌代謝熱譜圖與生物學(xué)培養(yǎng)過程中的各個階段，如停滯期、指數(shù)生長期、穩(wěn)定期及衰亡期能很好吻合。細菌代謝的熱譜圖完整地描述了細菌的代謝過程。細菌生長代謝的熱譜圖的指數(shù)生長段符合InPt=InPo+kt的線性方程。 2．生物熱動力學(xué)研究：采用生物熱動力學(xué)方法，以大腸桿菌、金黃色葡

3、萄球菌、痢疾桿菌及幽門螺桿菌為模型生物體，測定了黃連不同炮制品、黃連與吳茱萸不同劑量配比類方水提物的生物熱譜圖以及系列生物熱動力學(xué)參數(shù)。結(jié)果表明細菌生長速率常數(shù)K、代謝產(chǎn)熱量Q等生物熱動力學(xué)參數(shù)可以量化地表征黃連不同炮制品及類方的生物活性差異。k與Q值的排列順序為：吳茱萸制黃連>酒制黃連>姜制黃連>生黃連>膽汁制黃連>鹽制黃連>醋制黃連；反左金丸>茱萸丸>甘露散>左金丸。Q值變化規(guī)律與其傳統(tǒng)的寒熱藥性認知相吻合，說明生物熱動力學(xué)可作為評

4、價中藥藥性/活性的較好的研究方法。 3．常規(guī)藥理實驗研究：采用常規(guī)的體外抑菌試驗方法進行了黃連不同炮制品及左金丸類方抗幽門螺桿菌試驗研究，結(jié)果表明：左金丸類方及黃連不同炮制品對幽門螺桿菌的體外抑菌效果呈現(xiàn)差異，以醋制黃連及左金丸活性最強。本實驗結(jié)果驗證和支持了生物熱力學(xué)試驗結(jié)果。 4．化學(xué)組分研究：建立了黃連不同炮制品水提液、左金丸類方水提液、左金丸生物堿部位及非生物堿部位的HPLC指紋圖譜，并分析了其化學(xué)屬性，將化學(xué)組

5、分進行合成資料的主成分分析。統(tǒng)計結(jié)果表明黃連不同炮制品指紋圖譜的差異主要體現(xiàn)在化學(xué)組分Y3、藥根堿含量的變化；左金丸類方指紋圖譜的差異主要體現(xiàn)在吳茱萸堿、吳茱萸次堿、化學(xué)組分Y7、Y8的含量變化。聚類分析結(jié)果表明黃連不同炮制品的聚類與中藥藥性呈現(xiàn)出一定關(guān)聯(lián)；左金丸類方中以反左金丸與其它三類方的差異最為明顯。 5．左金丸抗幽門螺桿菌物質(zhì)的確定：左金丸類方的藥性/活性差異研究表明四類方中以左金丸抗幽門螺桿菌作用最強；黃連不同炮制品的藥性/活

6、性差異研究表明醋制黃連抗幽門螺桿菌作用最強；左金丸不同化學(xué)部位的藥性/活性差異研究表明生物堿部位為左金丸抗幽門螺桿菌的主要藥效物質(zhì)。 6．基于生物熱動力學(xué)表達的清熱類中藥及復(fù)方藥效物質(zhì)篩選模式和方法的構(gòu)建：通過對清熱藥中的代表性藥物-黃連及黃連與吳茱萸不同配伍類方-左金丸、茱萸丸、甘露散、反左金丸的研究，初步構(gòu)建了基于生物熱動力學(xué)表達的清熱類中藥及復(fù)方藥效物質(zhì)篩選模式，即通過生物熱動力學(xué)研究，結(jié)合化學(xué)組分分析及常規(guī)藥理學(xué)試驗研究

7、，運用主成分分析，典型相關(guān)分析等數(shù)理統(tǒng)計分析手段，進行生物熱動力學(xué)-常規(guī)藥理-化學(xué)組分的關(guān)聯(lián)分析，探求與功能主治相關(guān)的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。 7．左金漂浮片的藥學(xué)研究：在了解左金丸抗幽門螺桿菌有效部位的基礎(chǔ)上，初步探討了左金漂浮片制備工藝的相關(guān)內(nèi)容。結(jié)果認為D101大孔吸附樹脂可達到富集、純化左金生物堿部位的目的；通過先優(yōu)化漂浮性能工藝，再優(yōu)化滿足藥物釋放度工藝的方法可制備出既具較佳的漂浮性能，又具備合格藥物釋放度的漂浮片，其釋藥機制為