zRAP55，一個在斑馬魚卵母細胞中優(yōu)勢表達基因的鑒定.pdf

1、本研究分別針對zRAP55基因的生物信息學分、克隆、蛋白質表達和熒光免疫組織化學4個方面分析了zRAP55的基因和蛋白質結構以及在細胞中的定位和功能，結果如下： 通過對zRAP55cDNA進行了生物信息學分析，發(fā)現(xiàn)該基因位于斑馬魚第23個連鎖群上，包括9個外顯子和8個內含子，其最大開放閱讀框(ORF)位于116-1264bp，編碼382個氨基酸，采用Computepl/Mwtools對zRAP55蛋白進行預測分析，其理論等電點p

2、I為10.11，為一堿性蛋白質，分子量為26.29KD。用Tmpredprogram預測到該蛋白質的124-142氨基酸區(qū)域存在一個跨膜區(qū)域；預測結果表明該跨膜蛋白的N-terminal位于細胞膜內。Prosite分析表明該蛋白質包含谷氨酸富集區(qū)，而其他同源蛋白質序列都沒有發(fā)現(xiàn)谷氨酸富集區(qū)。在NCBI、EMBL和DDBJ數(shù)據(jù)庫中zRAP55的cDNA和預測蛋白質序列的Blast分析結果顯示：zRAP55與爪蟾(NP-001025676)

3、、小鼠(AAH40823)、人(NP_653304)、褐家鼠(EDL88837)等蛋白質序列一致性分別為59.7％、57.3％、57.2％和56.7％，上述蛋白均包括一個Lsm14保守域。 采用RT-PCR分析了zRAP55mRNA在各個組織中的表達情況，RT-PCR的擴增結果表明zRAP55在卵巢中表達量最高，肝臟和腎臟表達量極微弱，而腦、精巢和心臟三個組織均未檢測到表達。 熒光免疫組織化學結果表明，在第I時相卵母細胞

4、和II時相卵母細胞中，zRAP55的陽性信號強烈，均勻地分布于整個胞質，隨著卵母細胞的發(fā)育，在第III時相卵母細胞和IV時相卵母細胞中檢測不到信號，而整體卵巢中的表達情況則進一步證實了這一結果。這種表達模式表明zRAP55是一個在斑馬魚卵巢中表達尤其在早期卵母細胞(I和II)中特異性表達的基因，而且zRAP55含有一個Lsmdomain，因此本研究推測在斑馬魚卵巢組織中，zRAP55可能具有調控第I和第II時相卵母細胞蛋白質翻譯的作用。