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文檔簡(jiǎn)介
1、本文分兩個(gè)部分進(jìn)行探討:
第一部分:ACS患者外周血CD4+CD25+GARP+Tregs數(shù)目減少功能降低
目的:動(dòng)脈粥樣硬化(AS)是一種炎癥性和免疫反應(yīng)相關(guān)的疾病。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Tregs)是一群能夠抑制T細(xì)胞活化的細(xì)胞群,其在AS發(fā)病中起著保護(hù)作用。然而,迄今未發(fā)現(xiàn)Tregs的特異性標(biāo)志,直到最近發(fā)現(xiàn)的以糖蛋白A為主的重復(fù)序列(GARP),該膜蛋白被認(rèn)為是活化的Tregs的特異性標(biāo)志分子。因此,在我們的研究中,
2、我們利用GARP作為T(mén)regs的標(biāo)志。
方法:為了闡述GARP+Tregs是否在急性冠脈綜合征(ACS)患者體內(nèi)下調(diào),我們檢測(cè)了CD4+CD25+GARP+T細(xì)胞的數(shù)目、其抑制T細(xì)胞活化增殖的功能、及其與之相關(guān)的細(xì)胞因子。另外,我們比較了GARP和FOXP3的表達(dá),前者被認(rèn)為是更敏感的Tregs的標(biāo)志。
結(jié)果:ACS患者循環(huán)中CD4+CD25+GARP+Tregs的數(shù)目減少。ACS患者CD4+CD25+GARP+Tr
3、egs的抑制功能較穩(wěn)定型心絞痛(SA)和正常冠脈者(NCA)降低,與之相關(guān)的細(xì)胞因子水平也較AS及NCA對(duì)照組降低。另外,ACS患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)經(jīng)TCR刺激后其中CD4+CD25+GARP+Tregs較SA組和NCA組低。
結(jié)論:這些結(jié)果表明,ACS患者循環(huán)中CD4+CD25+GARP+Tregs受損,上調(diào)GARP可能會(huì)增強(qiáng)ACS患者體內(nèi)Tregs的保護(hù)功能。
第二部分:GARP基因過(guò)表達(dá)慢病毒載體與
4、基因沉默慢病毒載體的構(gòu)建與篩選
目的:過(guò)表達(dá)GARP能賦予初始T細(xì)胞部分調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的表型及功能,本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建GARP基因過(guò)表達(dá)慢病毒載體與基因沉默慢病毒載體,作為進(jìn)一步研究GARP在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病機(jī)制研究中的工具。
方法:將人GARP/LRRC32基因克隆在表達(dá)綠色熒光蛋白(GFP)的人類(lèi)免疫缺陷病毒來(lái)源的載體(HDV)上,設(shè)計(jì)出3個(gè)針對(duì)GARP的RNA干擾序列,并分別將其克隆在HDV上,利用RTPCR篩選有效的基
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