低劑量131I內(nèi)照射誘導小鼠胸腺細胞因子適應(yīng)性反應(yīng)的多基因表達.pdf

1、[目的]：
　　近年來，由于核技術(shù)的快速發(fā)展，131I不僅在臨床檢查甲狀腺功能和核素顯像診斷中被廣泛應(yīng)用，而且應(yīng)用于甲狀腺功能亢進癥和甲狀腺癌的放射治療。隨著131I在醫(yī)療衛(wèi)生領(lǐng)域中的廣泛應(yīng)用，131I對機體的影響也倍受人們關(guān)注。無論從整體水平和細胞水平，還是亞細胞和分子水平看，高劑量和中等劑量的131I對機體的損傷效應(yīng)是毋庸置疑的。但是，低劑量131I對機體的生物效應(yīng)仍未闡明。目前低劑量輻射誘導的適應(yīng)性反應(yīng)及其機制的探討，主要集

2、中在外照射，對于低劑量131I內(nèi)照射誘導小鼠胸腺細胞因子適應(yīng)性反應(yīng)及其多基因表達未見報道。本研究通過低劑量131I內(nèi)照射誘導小鼠胸腺細胞因子的變化，建立低劑量131I內(nèi)照射誘導小鼠胸腺因子適應(yīng)性反應(yīng)模型，并對低劑量131I內(nèi)照射誘導小鼠胸腺細胞因子適應(yīng)性反的多基因表達進行檢測和分析，為進一步深入研究低劑量輻射誘導適應(yīng)性反應(yīng)的機制提供實驗依據(jù)。
　　[方法]：
　　1.建立低劑量131I內(nèi)照射誘導小鼠胸腺細胞因子的適應(yīng)性反應(yīng)模

3、型
　　實驗分組:將同一批昆明小鼠隨機分為對照組(D0組)，低劑量組(D1組)，損傷劑量組(D2組)，低劑量131I預處理+損傷劑量組(D1+D2組)。
　　(1)利用32種細胞因子蛋白芯片檢測低劑量131I內(nèi)照射誘導小鼠胸腺細胞因子的變化，建立低劑量131I內(nèi)照射誘導小鼠胸腺細胞因子適應(yīng)性反應(yīng)的模型。
　　(2)對組間存在明顯差異的細胞因子進行ELISA驗證
　　2.低劑量131I內(nèi)照射誘導小鼠胸腺細胞因子適應(yīng)

4、性反應(yīng)的多基因表達
　　(1)利用小鼠全基因芯片篩選低劑量131I內(nèi)照射誘導小鼠胸腺細胞因子適應(yīng)性反應(yīng)的差異基因
　　(2)對組間存在明顯差異的基因進行基因本體論(Gene ontology，GO)功能分類
　　(3)對組間存在明顯差異的基因進行KEGG分析
　　(4)對差異基因進行qRT-PCR驗證
　　[結(jié)果]：
　　1.低劑量131I內(nèi)照射誘導小鼠胸腺細胞因子的適應(yīng)性反應(yīng)
　　(1)利用3

5、2種細胞因子蛋白芯片檢測D0組、D1組、D2組、D1+D2組四組小鼠胸腺細胞因子的變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)D2組小鼠胸腺內(nèi)細胞因子白介素2(IL-2)、白介素4(IL-4)含量明顯低于D0組，D1+D2組小鼠胸腺內(nèi)細胞因子IL-2和IL-4含量明顯高于D2組。
　　(2)對各組IL-2和IL-4含量差異結(jié)果進行ELISA驗證，結(jié)果發(fā)現(xiàn)D2組小鼠胸腺細胞IL-2和IL-4含量明顯低于D0組(P＜0.05），D1+D2組小鼠胸腺細胞IL-2和I

6、L-4含量明顯高于D2組(P＜0.05)，與蛋白芯片技術(shù)檢測結(jié)果相似。
　　2.低劑量131I內(nèi)照射誘導小鼠胸腺細胞適應(yīng)性反應(yīng)的多基因表達
　　(1)利用基因芯片表達譜技術(shù)發(fā)現(xiàn)D2組與D1+D2組的差異基因為74個，其中D1+D2組H2-B1等16個基因表達量顯著低于D2組(P＜0.05），D1+D2組Ak1、Camp、Eefla2、Mylk2、Epha2等58個基因表達量顯著高于D2組(P＜0.05）。對發(fā)現(xiàn)的D2組與D1

7、+D2組的74個差異基因進行GO功能分類，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Eefl a2和H2-B1基因參與細胞凋亡的調(diào)節(jié)，其中Eefla2基因參與細胞凋亡的負調(diào)控，H2-B1基因參與細胞凋亡的正調(diào)控;Ak1和Mylk2基因參與細胞周期的調(diào)節(jié)，Ak1基因參與細胞周期的負調(diào)控過程;Camp和Epha2基因參與細胞增殖的正調(diào)控過程，無基因參與負調(diào)控;對D2組與D1+D2組的74個差異基因進行KEGG分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Epha2參與了PI3K-Akt信號通路的調(diào)節(jié)。

8、r>　　(2)對通過小鼠基因芯片發(fā)現(xiàn)的差異表達的Ak1、Camp、Eefla2、Mylk2、Epha2、H2-B16個基因進行qRT-PCR驗證，結(jié)果發(fā)現(xiàn)D1+D2組Ak1、Epha2和Mylk2的表達量明顯高于D2組(P＜0.05），D1+D2組Camp和Eefla2表達量明顯高于D2組(P＜0.01); D1+D2組H2-B1的表達量明顯低于D2組(P＜0.01)，與基因芯片技術(shù)檢測結(jié)果一致。
　　[結(jié)論]：
　　1.低