UCMSCs和ECFCs在糖尿病小鼠下肢血管病變中的成血管作用.pdf

1、目的:研究探討臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(human umbilical cordmesenchymal stem cells，UCMSCs)、臍血來源的內(nèi)皮克隆形成細(xì)胞(endothelial-colony forming cells，ECFCs)及兩種細(xì)胞聯(lián)合移植治療糖尿病小鼠下肢血管病變的有效性、療效比較并初步探討其促進(jìn)血管新生的機(jī)制。
　　方法:1.建立糖尿病小鼠模型:將60只6周齡雄性C57BL/6J小鼠，腹腔注射鏈脲佐菌素(st

2、reptozotocin，STZ)150 mg/kg，分別在注射后第3天及第7天測隨機(jī)血糖，其中50只小鼠兩次隨機(jī)血糖＞16.7mmol/l，為糖尿病小鼠模型構(gòu)建成功;2.動物分組:將50只成功建立糖尿病模型的小鼠隨機(jī)分成五組，A組為UCMSCs移植組(n=10)，B組為ECFCs移植組(n=10)，C組為UCMSCs和ECFCs聯(lián)合移植組，D組為對照組，注射PBS(n=10)，E組為假手術(shù)組(n=10);3.制備糖尿病小鼠下肢缺血模型

3、:采用結(jié)扎并離斷左側(cè)下肢股動脈、股靜脈部分分支的方法成功構(gòu)建糖尿病下肢缺血模型，包括3組血管，即股淺動脈、股淺靜脈、胭動脈、腘靜脈、大隱動脈、大隱靜脈;4.觀察指標(biāo):觀察移植前后糖尿病小鼠缺血下肢皮膚的顏色的變化及傷口愈合情況，測定下肢缺血模型建立前后及干細(xì)胞移植后21天各組小鼠下肢皮溫及經(jīng)皮氧分壓(TcPO2)，應(yīng)用CM-Dil染料標(biāo)記移植干細(xì)胞，觀察干細(xì)胞的遷移、分化情況，應(yīng)用免疫組化法比較各組小鼠腓腸肌的血管密度，應(yīng)用Wester

4、n blotting方法檢測各組小鼠腓腸肌中VEGF、Akt及Erk1/2蛋白含量。
　　結(jié)果:1.建立下肢缺血模型后，小鼠下肢出現(xiàn)皮膚顏色變暗、趾端及趾甲發(fā)黑等缺血表現(xiàn)，與D組比較，A、B、C三組小鼠干細(xì)胞移植后下肢缺血情況改善，血流較前恢復(fù);A、B、C組小鼠傷口愈合時間較D組短，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);A組、C組小鼠愈合時間較B組小鼠愈合時間短，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，其中A、C兩組小鼠傷口愈合時間無明

5、顯差異(P＞0.05)。2.A、B、C、D組小鼠左下肢皮溫及TcPO2較建立缺血模型手術(shù)前明顯下降(P＜0.05)，E組無明顯變化(P＞0.05);干細(xì)胞移植后21天后，A、B、C組小鼠左下肢皮溫及TcPO2較移植前均有升高(P＜0.05)，D組小鼠升高不明顯(P＞0.05)，其中C組小鼠皮溫及TcPO2與A、B組小鼠相比較升高最顯著(P＜0.05)，A、B兩組小鼠升高無明顯差異(P＞0.05)。3.UCMSCs和ECFCs均可歸巢、遷

6、移到小鼠下肢腓腸肌肌纖維周圍，其中在血管周圍可見標(biāo)記后的UCMSCs。4.A、B、C三組小鼠下肢腓腸肌血管密度明顯高于D組及E組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(分別為P＜0.05，P＜0.05，P＜0.01)，其中血管密度最高的是C組，B組血管密度高于A組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。5.A、B、C三組小鼠下肢腓腸肌中VEGF、Akt及Erk1/2蛋白含量也明顯高于D組及E組，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，A、B、C三組兩兩比較結(jié)果顯

7、示，A、B兩組Akt及Erk1/2蛋白含量無明顯差異(P＞0.05)，B組VEGF蛋白含量高于A組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，C組VEGF、Akt及Erk1/2蛋白含量均高于A、B兩組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:1.UCMSCs和ECFCs移植能夠有效改善糖尿病缺血下肢血管病變情況，促進(jìn)新生血管形成。
　　2.UCMSCs和ECFCs兩種細(xì)胞聯(lián)合移植具有協(xié)同作用，比單獨移植一種細(xì)胞促血管新生作用