條斑紫菜(Porphyra yezoensis)R-藻紅蛋白的制備及其抗氧化、抗腫瘤活性研究.pdf

1、我國藻類資源十分豐富，是世界上最大的紫菜生產(chǎn)大國，集中在江蘇沿海的養(yǎng)殖和加工，其產(chǎn)量占全國的95％以上。紫菜中豐富的藻紅蛋白，因其抗氧化、抗癌、增強(qiáng)免疫力等功效，在食品、化妝品、醫(yī)療等領(lǐng)域得到日益廣泛的應(yīng)用。本文以江蘇產(chǎn)量豐富的條斑紫菜為原料，制備了R-藻紅蛋白，對其結(jié)構(gòu)特性進(jìn)行了研究，并通過體外活性試驗評價了其生物活性，具體結(jié)果如下：
　　 條斑紫菜經(jīng)超聲細(xì)胞破碎、硫酸銨二次鹽析、超濾膜超濾、結(jié)晶一周后，提取得到的R-藻紅蛋白

2、純度為2.05，達(dá)到藥品級要求（A562nm/A280nm>2）。用DEAECellulose-52（2.6×40 cm）層析純化R-藻紅蛋白，NaCL濃度為0.2 mol/L時，洗脫出R-藻紅蛋白主峰，洗脫液呈粉紅色，純度最高達(dá)5.24，符合試劑級要求（A562nm/A280nm>4）。
　　 通過紫外-可見光譜鑒定DEAE Cellulose-52柱層析得到的試劑級R-藻紅蛋白的純度，吸收波長為562nm，540 nm處有一

3、肩峰。SDS-PAGE電泳分離得到R-藻紅蛋白的α和β亞基，α亞基的相對分子質(zhì)量約為16 kDa，β亞基的相對分子質(zhì)量約為19 kDa。熒光光譜分析得到，條斑紫菜純R-藻紅蛋白的激發(fā)波長為477 nm，最適發(fā)射波長為在572 nm。
　　 傅立葉轉(zhuǎn)換紅外光譜（FTIR）測定結(jié)果顯示，藥品級R-藻紅蛋白，在1656cm-1和1454cm-1之間的雙峰表明R-藻紅蛋白結(jié)構(gòu)中存在共軛雙鍵。R-藻紅蛋白中，含有除色氨酸外的7種必需氨基酸

4、，占氨基酸總量的37％，含量從高到低的順序是：亮氨酸>纈氨酸>蘇氨酸>異亮氨酸>賴氨酸>苯丙氨酸>蛋氨酸。在所有的氨基酸中，呈鮮味濃的谷氨酸的含量最多，其次是丙氨酸和天門冬氨酸。
　　 R-藻紅蛋白的還原力測定、羥自由基和超氧陰離子清除率的測定，證實R-藻紅蛋白具有較強(qiáng)的還原力和抗氧化作用，對羥自由基清除率的IC50值為608.9μg/mL，在超氧陰離子清除實驗中，對鄰苯三酚自氧化速率的抑制率高達(dá)80.7％。
　　 R-

5、藻紅蛋白對人胃癌細(xì)胞SGC和乳腺癌細(xì)胞MCF進(jìn)行的48h抑制作用研究結(jié)果表明，在實驗劑量范圍內(nèi)，隨R-藻紅蛋白濃度的增加而抑瘤作用增大。對SGC的抑制，R-藻紅蛋白濃度為800μg/mL時，抑制率為23.58％。當(dāng)R-藻紅蛋白的濃度為200μg/mL時，對MCF的抑制即達(dá)30.03％；R-藻紅蛋白濃度增至1600μg/mL，其抑制率超過50％。R-藻紅蛋白對兩種癌細(xì)胞的抑制都呈劑量正向關(guān)系。
　　 Annexin V-FITC/

6、PI法檢測不同濃度的藥品級R-藻紅蛋白作用SGC48h凋亡誘導(dǎo)的作用情況，對照細(xì)胞的總凋亡比例為5.04％，100、200、400、800、1600μg/mL不同濃度的R-藻紅蛋白組細(xì)胞總凋亡比例分別為9.21％、5.80％、7.02％、9.71％和9.31％；R-藻紅蛋白對MCF細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)實驗中對照組的總凋亡比例為0.56％，而100、200、400、800μg/mL不同濃度的R-藻紅蛋白組細(xì)胞總凋亡比例分別為38.68％、19.