壇紫菜藻紅蛋白提取、分析及抗腫瘤活性研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、壇紫菜(Porphyraaitanensis)是我國南方沿海人工養(yǎng)殖的經濟海藻主要品種之一,資源豐富。壇紫菜含有豐富的藻紅蛋白(phycoerythrin、PE),可用于大量制備PE的原料。近年來,已有學者對壇紫菜藻紅蛋白提取、分離純化、結構和抗氧化活性等作了一些研究,但目前藻紅蛋白的生理活性研究還很不夠,尤其是其抗腫瘤活性未見報道。本論文對產于廣東汕頭南澳海區(qū)壇紫菜中的藻紅蛋白進行了以下研究:
 ?。?)藻紅蛋白提取分離采用反復

2、凍融法破碎藻體細胞,25%~50%飽和度硫酸銨二步鹽析沉淀藻紅蛋白得粗提物,利用兩步柱層析對藻紅蛋白粗提物進行分離純化,即先過sephadexG-100層析柱再過DEAE-cellulose柱層析。在此條件下分離得到的藻紅蛋白純度(A565/A280)達3.3,藻紅蛋白得率為1.68mg/g干壇紫菜。
 ?。?)藻紅蛋白組成結構分析SDS-PAGE電泳分析顯示:壇紫菜藻紅蛋白有α、β、γ三個亞基,分子量分別為18KDa、23KDa

3、和33KDa;紫外光譜及熒光發(fā)射光譜分析可見藻紅蛋白在490nm、532及570nm處有吸收峰,最大吸收峰為565nm,據此判斷該藻紅蛋白為R型藻紅蛋白(R-PE),與有關文獻報道的一致。
 ?。?)體外抗腫瘤作用及機理利用MTT比色法探討了R-PE光動力治療(Phtodyna-mictherapy,PDT)對人宮頸癌Hela細胞的影響。結果表明:R-PE結合PDT(簡稱R-PE+PDT)處理能夠顯著增強R-PE對Hela細胞的殺

4、傷作用,60μg/mL的R-PE+PDT處理24h對Hela細胞的抑制率達81.4%,在此處理條件下人正常內皮細胞生長幾乎不受影響。利用AnnexinV-FITC/PI雙熒光染色法檢測了經R-PE+PDT處理的Hela細胞,結果表明,在劑量為0~60μg/mL范圍內,隨著R-PE劑量的增加,凋亡細胞和凋亡晚期細胞或壞死細胞隨之增多,提示R-PE可誘導Hela細胞的凋亡,而PDT處理可以加強這一作用。DNAladder電泳結果顯示:經R-

5、PE+PDT處理Hela細胞,Hela細胞基因組DNA在100~400bp出現壞死解散的彌散條帶。QRT-PCR檢測發(fā)現,與空白組比較,R-PE能夠顯著提高Hela細胞中caspase-3、caspase-10基因表達水平、下調抗凋亡蛋白基因Bcl-2表達水平誘導細胞凋亡,從而抑制Hela細胞的生長。
 ?。?)體外抗氧化實驗檢測了R-PE對DPPH·自由基的清除作用,當2.5mg/mLR-PE(純度2.45)時對DPPH·清除率

6、達89.4%,明顯高于對照物維生素C。
  (5)利用小鼠S180腫瘤模型,研究了R-PE體內抗腫瘤作用及其機理。R-PE溶液經口灌胃,當給藥劑量為300mg/kg·d時,抑瘤率達到41.3%。對荷瘤小鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量的測定結果表明,R-PE能提高機體抗氧化能力;免疫作用研究發(fā)現,R-PE對荷瘤小鼠胸腺、脾臟等免疫器官有很好的保護作用,能提高荷瘤小鼠脾淋巴細胞對ConA的增殖反應,增強荷瘤

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