杭白芍種胚叢生芽誘導(dǎo)途徑再生體系的初步建立.pdf

1、芍藥（Paeonia lactiflora Pall.）作為我國傳統(tǒng)名貴花卉深受人們喜愛，長期以來由于繁殖系數(shù)低，繁殖周期長限制了芍藥育種進(jìn)程和產(chǎn)業(yè)發(fā)展，一直以來寄望于芍藥組織培養(yǎng)再生體系的建立實(shí)現(xiàn)芍藥快速擴(kuò)繁因存在諸多基礎(chǔ)難題而始終沒有實(shí)現(xiàn)。本研究以藥用、油用價(jià)值極高的杭白芍（P.lactiflora‘Hang Bai’）品種為研究對象，通過不同種類植物生長調(diào)節(jié)劑配比誘導(dǎo)種胚外植體產(chǎn)生叢生芽，實(shí)現(xiàn)叢生芽增殖擴(kuò)繁，進(jìn)一步誘導(dǎo)叢生芽苗生根

2、形成完整植株，初步建立了芍藥種胚叢生芽誘導(dǎo)途徑的直接器官發(fā)生再生體系。該途徑不需經(jīng)過脫分化和再分化過程，大大縮短了再生周期，同時(shí)采用種胚建立的無菌體系克服了芍藥外植體初代培養(yǎng)出現(xiàn)的污染難以控制問題和后期生根誘導(dǎo)困難等基礎(chǔ)難題。本試驗(yàn)材料取自山東菏澤曹州牡丹園，試驗(yàn)于7月下旬杭白芍（花期5月上旬）果莢初裂、種子由綠轉(zhuǎn)為深褐色時(shí)進(jìn)行采收，洗凈后存儲于4℃冰箱內(nèi)進(jìn)行試驗(yàn)研究。試驗(yàn)研究主要結(jié)果如下:
　　1.接種前對種子經(jīng)過52h蒸餾水浸

3、種處理后，使用70％乙醇滅菌處理30s結(jié)合2.0％次氯酸鈉滅菌處理15～20min后剝離胚進(jìn)行接種，滅菌效果好，外植體材料污染率低7.89％且接種時(shí)胚損失率低6.60％。
　　2.胚培養(yǎng)條件控制中通過設(shè)置不同時(shí)間梯度的暗培養(yǎng)處理得出杭白芍胚萌發(fā)率及胚生長發(fā)育與暗培養(yǎng)處理沒有直接關(guān)系。
　　3.適宜的杭白芍胚成苗培養(yǎng)基是MS+6-BA1.0mg/L+GA31.0mg/L，接種7d后萌發(fā)，種胚萌發(fā)率為90％以上，大大提高了芍藥胚

4、萌發(fā)率，同時(shí)打破芍藥種胚休眠，縮短了育種周期。比芍藥在自然條件下播種經(jīng)過7個(gè)月萌發(fā)，萌發(fā)率約40％和使用植物激素處理打破種子休眠后播種3個(gè)月萌發(fā)，萌發(fā)率60％-80％，有著明顯的優(yōu)勢。
　　4.試驗(yàn)結(jié)果認(rèn)為活性炭會促進(jìn)種胚胚根的優(yōu)先發(fā)育，隨著活性炭含量的增加，胚根發(fā)育較快，根系生長纖細(xì)，真葉萌發(fā)遲緩，最終難以形成健壯的胚苗。在未添加活性炭的培養(yǎng)基中種胚萌發(fā)經(jīng)過90d長成4cm高的幼苗，大大縮短了芍藥育種周期，經(jīng)過130-160d培

5、育出高8cm的幼苗，生長良好，通過調(diào)節(jié)6-BA（2.0～3.0mg/L）濃度進(jìn)行繼代建立了穩(wěn)定的芍藥胚苗培養(yǎng)體系。
　　5.種胚接種在培養(yǎng)基MS+6-BA1.5mg/L+GA31.0mg/L上萌動快，易于誘導(dǎo)出健壯叢生芽苗，培養(yǎng)45d時(shí)轉(zhuǎn)接在MS+6-BA3.0mg/L+GA31.0mg/L+PVP1.0g/L進(jìn)行叢生芽誘導(dǎo)，30d后外植體平均增殖系數(shù)為1.27。叢生芽適宜的生根培養(yǎng)基為1/2MS+IBA1.0mg/L+NAA0.

6、5mg/L+PVP1.0g/L+AC0.4g/L，添加1.0g/L PVP有利于減輕外植體褐化程度，NAA0.5mg/L與IBA1.0mg/L配合有助于提高叢生芽生根率，分切后的叢生芽苗培養(yǎng)45d，生根率達(dá)48.72％，其培養(yǎng)周期有120d。叢生芽增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA2.0mg/L+GA31.0mg/L,40d后平均增殖系數(shù)為2.53，經(jīng)過45d生根誘導(dǎo)培養(yǎng)，生根率23.77％，兩次增殖擴(kuò)繁后平均增殖系數(shù)達(dá)到3.21，培養(yǎng)周期有1