異氟烷預處理對心臟瓣膜置換術患者心肌蛋白質組的影響.pdf

1、研究目的：1.對異氟烷預處理對人缺血再灌注損傷心肌的保護作用進行臨床觀察。2.采用蛋白質組學方法研究異氟烷預處理對人缺血再灌注損傷心肌蛋白質表達譜的影響，尋找可能參與異氟烷預處理早期相心肌保護作用的蛋白質。3.用免疫印跡法檢測其中某些差異表達的蛋白質，以進一步確定這些差異表達蛋白質在異氟烷預處理心肌保護中的作用。
　　 研究方法：實驗分三部分：(1)擇期心肺轉流術下行雙瓣膜置換術的風濕性心臟聯(lián)合瓣膜病患者30例，隨機分為對照組(

2、n=15)和異氟烷預處理組(異氟烷組，n=15)。異氟烷組在麻醉誘導后吸入1.1％～1.2％(呼氣末濃度)異氟烷30 min，洗脫15 min。對照組不吸入異氟烷，其余用藥2組無區(qū)別。分別于麻醉誘導后吸入異氟烷前(T0)、主動脈開放30min(T1)、關胸后(T2)、主動脈開放6h(T3)、12h(T4)和24h(T5)測量和記錄肺動脈導管數(shù)據(jù)：分別于T0、Tl、T3、T4和T5取血測血清肌鈣蛋白(cTnI)、肌酸磷酸激酶同工酶(CKM

3、B)濃度。分別于主動脈阻斷前(上腔靜脈插管時)和主動脈開放后(上腔靜脈退管時)取部分右心耳組織，用光學顯微鏡和電子顯微鏡觀察心肌組織與細胞的結構變化。(2)用雙向凝膠電泳法分離異氟烷組和對照組體外循環(huán)后心肌組織蛋白質，經(jīng)圖像分析找出差異表達蛋白質，再用基質輔助激光解吸/電離飛行時間質譜鑒定部分差異表達蛋白質。(3)根據(jù)第二部分結果，用免疫印跡法(Western Blot)檢測其中某些差異表達蛋白質。
　　 研究結果：1.異氟烷組

4、和對照組MABP在T1～T4時和T0比較降低，PAOP在T2～T5時降低，SVR在T1～T5時降低，SV、SI在T1～T5時升高，CO、CI和LVSWI在T1～T5時升高，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05或P<0.01)。異氟烷組PAOP在T5時和對照組比較降低，SV和SI在T4～T5時升高，CO、CI和LVSWI在T3～T5時升高，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05或P<0.01)。異氟烷組和對照組cTnI、CKMB基礎值之間無顯著性差

5、別，異氟烷組T3后cTnI低于對照組，T1后CKMB低于對照組，2組間比較有顯著性差異(P<0.05)。光鏡與電鏡結果顯示異氟烷組心肌細胞損傷輕于對照組。2.蛋白質組學結果：2-DE圖像顯示對照組有417士15個蛋白點，異氟烷組有454+19個蛋白點。經(jīng)凝膠圖像分析找到差異表達蛋白質點20個，基質輔助激光解析.電離飛行時間對差異表達蛋白質進行鑒定，共鑒定出16個蛋白質。其中，在異氟烷組有6個蛋白質表達上調，3個蛋白質表達下調，有1個新合

6、成的蛋白質，但異氟烷組有10個蛋白質未能得到匹配。這些蛋白質包括細胞骨架蛋白(α-肌動蛋白、α-肌球蛋白重鏈、結蛋白、波形蛋白)、代謝相關蛋白(醛糖還原酶、3-磷酸甘油醛脫氫酶、線粒體ATP酶)、轉錄相關蛋白(普通轉錄因子ⅢC、轉錄因子AP2、鋅指蛋白771)、離子通道蛋白(瞬時型陽離子感受器通道)等。3.采用免疫印跡技術對其中a-肌動蛋白(200號)、α-肌球蛋白重鏈(277號)、波形蛋白(221號)、線粒體ATP酶(47號)進行驗證

7、，發(fā)現(xiàn)上述四種蛋白質的表達在異氟烷預處理組明顯上調。
　　 研究結論：1.異氟烷預處理后人心肌組織蛋白質表達譜發(fā)生變化，這些差異表達蛋白質可能通過減少細胞骨架破壞、改善能量代謝等發(fā)揮異氟烷預處理早期相的心肌保護作用。這是首次發(fā)現(xiàn)異氟烷預處理早期相保護作用與α-肌動蛋白、α-肌球蛋白重鏈、結蛋白、波形蛋白、醛糖還原酶、3-磷酸甘油醛脫氫酶、線粒體ATP酶、普通轉錄因子ⅢC、轉錄因子AP2、鋅指蛋白771、瞬時型陽離子感受器通道有關