TGF-β對小鼠肺內(nèi)TREM-1表達的影響及其機制.pdf

1、髓樣細胞表達觸發(fā)受體-1(TREM-1)可通過放大Toll樣受體(TLR)及Nod樣受體(NLR)介導的免疫應答信號，延長巨噬細胞壽命，發(fā)揮炎癥放大作用。TGF-β被公認為肺纖維化最為關鍵的致纖維化因子，TREM-1可顯著上調(diào)TGF-β家族的表達，而TGF-β對TREM-1表達的影響尚未見報道。
　　目的:
　　觀察TGF-β對小鼠肺內(nèi)TREM-1表達的影響并探討其機制。
　　方法:
　　Swiss小鼠經(jīng)氣管一次

2、性注射博萊霉素(BLM)15 mg/kg復制肺纖維化模型，分別于第7、14和21天處死。HE染色和Masson染色驗證肺纖維化小鼠模型是否建立成功;Real-time PCR或RT-PCR檢測Ⅰ、Ⅲ型膠原、TGF-β、TREM-1及其轉(zhuǎn)錄因子c-Jun的轉(zhuǎn)錄水平;Western Blot檢測小鼠肺組織TREM-1的蛋白含量;流式細胞術檢測含TREM-1的陽性細胞數(shù)，以反映小鼠巨噬細胞TREM-1的蛋白水平;定點突變技術和雙熒光素酶報告基

3、因試驗證明轉(zhuǎn)錄因子c-Jun參與TGF-β上調(diào)小鼠巨噬細胞TREM-1表達的轉(zhuǎn)錄機制。
　　結(jié)果:
　　肺纖維化小鼠模型建立成功。小鼠肺組織TGF-β和TREM-1表達在BLM組第7、14和21天均增加(P＜0.05)，且二者呈正相關（r=0.787，P＜0.05）。TGF-β呈時間和劑量依賴性上調(diào)小鼠巨噬細胞TREM-1 mRNA和蛋白水平(P＜0.05)。小鼠肺組織c-Jun mRNA表達在BLM組第7、14和21天增加

4、(P＜0.05)，且分別與TGF-β（r=0.713，P＜0.05）、TREM-1的表達呈正相關(r=0.906，P＜0.05)。TGF-β呈時間和劑量依賴性上調(diào)小鼠巨噬細胞c-Jun mRNA表達(P＜0.05)。定點突變技術和雙熒光素酶報告基因試驗結(jié)果顯示:TGF-β刺激顯著增加TREM-1野生型質(zhì)粒的相對熒光強度(P＜0.05)，而對TREM-1突變型質(zhì)粒（TREM-1的AP-1位點定點突變）無明顯影響（P＞0.05）。PKC抑制

5、劑H-7、CaM抑制劑W-7及MAPK抑制劑PD98059顯著逆轉(zhuǎn)TGF-β誘導小鼠巨噬細胞TREM-1 mRNA和蛋白水平的上調(diào)（P＜0.05）。
　　結(jié)論:
　　1.TREM-1在肺纖維化小鼠肺組織中表達增加。
　　2.肺纖維化小鼠肺組織TGF-β與TREM-1的表達呈正相關。
　　3.TGF-β上調(diào)小鼠巨噬細胞TREM-1表達，其機制通過PKC、CaM及MAPK信號通路增加TREM-1的轉(zhuǎn)錄因子c-Jun水