島葉癲癇大鼠海馬Arc、GAP-43及P38表達變化對軸突出芽和突觸可塑性的影響.pdf

1、目的:電刺激Sprague-Dawley大鼠島葉，建立慢性電點燃模型，觀察大鼠慢性期的自發(fā)反復發(fā)作特點及組織學改變；并觀察在不同時間點Arc、 GAP-43及P38mRNA和蛋白在海馬環(huán)路內各區(qū)域表達、分布的動態(tài)變化過程，探討它們在MFS、突觸重建等突觸可塑性方面的作用。為進一步研究島葉癲癇的發(fā)病機制提供理論依據。
　　 方法：1.大鼠島葉慢性電點燃癲癇模型的建立及病理觀察：健康雄性SD大鼠48只，隨機分成四組：島葉點燃組(IK

2、)、杏仁核點燃組(AK)、島葉杏仁核同時點燃組(BK)和空白對照組?？瞻讓φ战M：不安置電極，在別的大鼠刺激時抓取2次。島葉組(IK)、杏仁核組(AK)、島葉杏仁核同時點燃組(BK)組分別在島葉、杏仁核和島葉及杏仁核安放雙極電極，并通過每日2次刺激，刺激參數：強度為后放閾1.5倍，頻率60 Hz，波寬1 ms，持續(xù)時間1 s，建立島葉、杏仁核電點燃慢性癲癇模型。處死大鼠，應用HE染色、Nissl染色和Timm染色等技術，對點燃模型大鼠海馬

3、神經元形態(tài)學進行觀察。
　　 2.島葉癲癇海馬突觸可塑性與Arc、GAP-43及P38的相關性研究：健康雄性SD大鼠72只，隨機分為島葉點燃組和假手術組，每組均36只大鼠。島葉點燃組和假手術組各隨機分為1、3、7、15、30及60d 6個亞組，每亞組大鼠6只。處死大鼠，標本應用免疫組化、原位雜交組織化學方法研究島葉電點燃致癲大鼠海馬Arc、GAP-43及P38表達的變化。
　　 結果：1.成功建立島葉慢性電點燃癲癇模型：

4、島葉組和杏仁核組后放閾值有顯著差異(P<0.05)；三組點燃時間有顯著差異，島葉組點燃最快，島葉杏仁核同時點燃組點燃最慢(P<0.05)；三組點燃率無明顯差異。Nissl染色顯示，空白對照組大鼠CA3、CA1區(qū)及齒狀回分別見大量致密的錐體細胞及顆粒細胞，門區(qū)有中等量神經元，排列整齊，形態(tài)完整，胞漿內尼氏小體豐富。島葉點燃組(IK)、杏仁核點燃組(AK)、島葉杏仁核同時點燃組(BK)組：CA3、CA1區(qū)及齒狀回區(qū)可見部分錐體細胞及顆粒細胞

5、形態(tài)不完整，部分腫脹、破裂，細胞輪廓模糊、境界不清，排列紊亂，細胞間距加大，胞漿尼氏小體減少，齒狀回顆粒細胞邊界不整齊、增寬，排列松散、紊亂。Timm染色法對島葉點燃組(IK)、杏仁核點燃組(AK)和島葉杏仁核同時點燃組(BK)癲癇后海馬內苔蘚纖維出芽情況進行了觀察，三組模型致癲后4周均可見到苔蘚纖維穿越齒狀回顆粒細胞層到達內分子層，并在此形成一條致密的層狀帶。
　　 2.島葉點燃組和假手術組大鼠致癲后不同時間點間海馬錐體細胞C

6、A3、CA1 ArcmRNA及蛋白表達無明顯差異，輻射層神經元雜交信號及免疫染色較少，顆粒細胞非常弱，染色接近背景水平。GAP-43mRNA及蛋白表達：致癲1d，海馬齒狀回顆粒細胞、門區(qū)、CA3區(qū)錐體細胞層GAP-43mRNA及蛋白表達高于對照組(P＜0.05)；致癲3d，表達減少(P＞0.05)，致癲7d后，表達呈現第2次增高；15d、30d顯著高于對照組(P＜0.01)；致癲60d，仍高于對照組，但無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。P3

7、8 mRNA及蛋白表達：致癲7d，齒狀回顆粒細胞層、門區(qū)、CA3區(qū)椎體細胞雜交信號及免疫染色開始增；15d時差異達高峰(P＜0.01)，這些變化一直持續(xù)到4周開始下降。
　　 結論：1.電刺激島葉成功建立了慢性癲癇點燃模型，進一步證實了島葉是一些癲癇發(fā)作的獨立致癇源，本身即具備致癲潛能。2.島葉點燃模型能夠誘發(fā)海馬苔蘚纖維出芽，證明了島葉癲癇和海馬關系緊密，海馬在島葉點燃癲癇模型中起著重要作用。3.Arc、GAP-43和P38m