LBP基因多態(tài)性、APACHEⅡ評(píng)分和降鈣素原對(duì)ARDS預(yù)警作用的初步研究.pdf

1、背景:急性呼吸窘迫征(Acute respiratory distress syndrome,ARDS)是一種由肺部感染、創(chuàng)傷及急性胰腺炎等多種肺內(nèi)、外致病因素導(dǎo)致的肺部炎癥反應(yīng),以肺順應(yīng)性降低、頑固性低氧血癥及非心源性肺水腫為主要臨床表現(xiàn),預(yù)后差。盡管近年對(duì)ARDS的發(fā)病機(jī)制有了深入的理解,臨床治療ARDS的策略也有一定的改進(jìn),但其死亡率仍沒(méi)有明顯下降。因此,如能早期甄別 ARDS高危患者,及時(shí)進(jìn)行 ARDS的防治,可望降低ARDS發(fā)

2、病率、改善其預(yù)后。然而,由于ARDS的發(fā)病因素復(fù)雜,影響疾病進(jìn)展的因素多,目前尚無(wú)理想的ARDS預(yù)警模型。目前的研究表明,僅依靠患者臨床資料或一些肺部炎癥反應(yīng)、細(xì)胞損傷相關(guān)的生物標(biāo)志物并不能取得滿意的預(yù)測(cè)效果。因此,本研究擬分別從與ARDS發(fā)病相關(guān)的基因及臨床資料聯(lián)合生物標(biāo)志物兩方面著手,探討LBP基因多態(tài)性、APACHEⅡ評(píng)分和降鈣素原對(duì)急性呼吸窘迫綜合征的預(yù)警作用。
　　研究目的:本研究擬探討 LBP基因多態(tài)性、APACHEⅡ

3、評(píng)分和降鈣素原對(duì)急性呼吸窘迫綜合征的預(yù)警作用,以期得到較為理想的ARDS預(yù)警模型。
　　研究?jī)?nèi)容和方法:
　　1.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì):本研究分為以下兩個(gè)部分:(1)以222例內(nèi)毒素血癥患者為研究對(duì)象,通過(guò)snapshot方法檢測(cè)LBP15個(gè)SNP位點(diǎn)的基因多態(tài)性,結(jié)合患者是否發(fā)展為ARDS,尋找LBP與ARDS易感性相關(guān)的SNP位點(diǎn)及基因型。(2)以78例肺部感染患者為研究對(duì)象,結(jié)合患者是否發(fā)展為ARDS,繪制受試者工作特征曲線,探討

4、APACHEⅡ評(píng)分、降鈣素原對(duì)肺部感染患者發(fā)展為ARDS的預(yù)測(cè)價(jià)值。
　　2.外周血的處理和DNA提取:在患者入住ICU24小時(shí)內(nèi)采集5ml EDTA抗凝靜脈血,分離血漿并進(jìn)行內(nèi)毒素檢測(cè)。提取DNA,于-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?br>　　3. snapshot方法檢測(cè)患者LBP基因15個(gè)SNP位點(diǎn)信息。
　　4.記錄患者的臨床基線資料,包括 APACHEⅡ評(píng)分,年齡、性別、病人來(lái)源,慢性合并癥,入院診斷等基本人口學(xué)資料和采集血

5、液標(biāo)本時(shí)患者的細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果。其中肺部感染患者還需記錄動(dòng)脈血?dú)?、血沉、C-反應(yīng)蛋白、乳酸、降鈣素原及1周內(nèi)的痰培養(yǎng)結(jié)果。
　　5.統(tǒng)計(jì)方法:每個(gè) SNP的等位基因及基因型的頻率根據(jù)基因檢測(cè)結(jié)果計(jì)算得到,基因型分布的檢驗(yàn)通過(guò)HWE(Hardy Weinberg Equilibrium,哈迪-溫伯格平衡定律)檢驗(yàn)得到,P>0.05表示符合哈迪-溫伯格平衡定律。LD圖的構(gòu)建通過(guò)Haploview軟件制作得到。rs2232618與ARDS易

6、感性的分析通過(guò)卡方檢驗(yàn)獲得。年齡、性別、內(nèi)毒素濃度等混雜因素的影響通過(guò)logistic回歸方法排除。正態(tài)分布資料的組間比較采用t檢驗(yàn)或方差分析,非正態(tài)分布資料的組間比較采用秩和檢驗(yàn)。預(yù)測(cè)作用采用受試者工作特征曲線(ROC曲線)方法,兩預(yù)測(cè)指標(biāo)的聯(lián)合采用二元Logistic回歸方法。
　　研究結(jié)果:
　　1.基因預(yù)警實(shí)驗(yàn)中,總共納入內(nèi)毒素血癥患者222例,其中男性154例,女性58例,年齡61.0±17.3(17~93)歲。7

7、天內(nèi)發(fā)展為ARDS的患者49例,ARDS發(fā)生率為22.1％。革蘭陰性菌感染66例,占29.7%;其他病原菌及混合感染46例,占21.1%;未得到明顯致病菌110例,占49.2%。
　　2.222例內(nèi)毒素血癥患者15個(gè)SNP位點(diǎn)的MAF與HapMap數(shù)據(jù)庫(kù)中相似。其中13個(gè)SNP位點(diǎn)基因型的分布符合哈迪-溫伯格平衡定律(P>0.05),提示其等位基因及基因型頻率在人群中的遺傳是恒定的。APACHEII評(píng)分在rs2232618位點(diǎn)不同

8、的基因型中無(wú)差異(P>0.05)。
　　3.僅rs2232618與ARDS的易感性有關(guān)。攜帶有等位基因C(基因型CC/CT)的患者其發(fā)生ARDS的概率明顯高于不攜帶等位基因C(基因型TT)的患者(P=0.001)。通過(guò) logistic回歸分析發(fā)現(xiàn),在排除年齡、性別、內(nèi)毒素濃度等影響后,rs2232618與ARDS的易感性仍密切相關(guān)(P=0.002)。
　　4.臨床資料及生物標(biāo)志物預(yù)警實(shí)驗(yàn)中,總共納入肺部感染患者78例,其中

9、男性患者60例,女性患者18例,年齡65.2±17.6(25~93)歲。7天內(nèi)發(fā)展為ARDS的患者有33例,ARDS發(fā)生率42.3%。ARDS組APACHEⅡ評(píng)分和降鈣素原顯著高于非ARDS組,分別為[(19.9±8.3) vs(15.6±6.0), P=0.013]和(12.6±11.4)ng/L vs(7.5±10.5)ng/L, P=0.046],氧合指數(shù)低于非ARDS組,為[(109.9±82.6) vs(252.1±92.4)

10、, P=0.003]。
　　5. APACHEⅡ評(píng)分和降鈣素原對(duì)肺部感染誘發(fā) ARDS的預(yù)測(cè)作用相當(dāng)(AUROC:0.651 vs0.657,P=0.929),且兩者聯(lián)合后,對(duì)ARDS的預(yù)測(cè)作用較兩者單獨(dú)的預(yù)測(cè)作用無(wú)顯著提高。
　　結(jié)論:
　　1. LBP基因 rs2232618位點(diǎn)攜帶等位基因C(基因型CC+TC)的患者更易發(fā)生內(nèi)毒素性ARDS。該位點(diǎn)T→C的突變可能是預(yù)測(cè)內(nèi)毒素性ARDS的一個(gè)較為理想的預(yù)警指標(biāo)。<