BMSCs源性神經(jīng)元與自體神經(jīng)元間形成的研究.pdf

1、[目的]
　　 利用體外模擬細胞移植共培養(yǎng)體系對大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs)與大鼠脊髓神經(jīng)元進行共培養(yǎng)，觀察BMSCs定向誘導(dǎo)分化為神經(jīng)元樣細胞與宿主神經(jīng)元之間功能性突觸連接的形成，為BMSCs移植治療脊髓損傷的可行性提供實驗依據(jù)。
　　 [方法]
　　 無菌條件下取大鼠股骨骨髓，經(jīng)體外分離后用全血培養(yǎng)法培養(yǎng)獲得BMSCs，并進行擴增、純化、鑒定。取第3代BMSCs用PKH26熒光染料進行標記，與來源于新生

2、大鼠脊髓的原代神經(jīng)元和膠質(zhì)細胞進行共培養(yǎng)，并在神經(jīng)元無血培養(yǎng)基中加入20 ng/mL表皮生長因子(EGF)、20 ng/mL堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)作為誘導(dǎo)劑，在體外建立模擬細胞移植的共培養(yǎng)體系。經(jīng)過共培養(yǎng)10天后，通過檢測共培養(yǎng)細胞間的突觸后致密蛋白95(PSD-95)表達情況，用Fluo-3/AM標記共培養(yǎng)細胞的胞質(zhì)鈣離子，經(jīng)高濃度的KCI刺激后，通過激光共聚焦顯微鏡觀察顯示鈣流熒光強度變化來反映兩種細胞間突觸連接鈣離子的

3、活動。
　　 [結(jié)果]
　　 用PKH26標記的BMSCs與新生大鼠脊髓神經(jīng)元在體外共培養(yǎng)過程中，在含有EGF、bFGF的無血清培養(yǎng)基情況下能誘導(dǎo)分化為神經(jīng)元樣細胞，并能與宿主神經(jīng)元形成突觸樣結(jié)構(gòu)，免疫組織化學方法結(jié)果顯示PSD-95表達陽性，在激光共聚焦顯微鏡下可以觀察到共培養(yǎng)的細胞經(jīng)高濃度KC1刺激后的胞質(zhì)鈣流熒光強度增加。
　　 [結(jié)論]
　　 在體外模擬細胞移植共培養(yǎng)體系中，BMSCs源性神經(jīng)元樣