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文檔簡介
1、[目的]
將大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(Rat Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,BMSCs)在體外進行誘導(dǎo)分化為神經(jīng)元樣細胞,然后在培養(yǎng)液中加入TSP1,觀察誘導(dǎo)后大鼠骨髓源性神經(jīng)元樣細胞突觸形成的變化;探討TSP1促進突觸形成的可行性,為BMSCs移植治療脊髓損傷提供實驗依據(jù)。
[方法]
提取大鼠BMSCs,并在體外擴增、純化和鑒定。取第3-5代BMSCs,用Neuroba
2、sal、2%B27、20μg/L表皮生長因子(EGF)、20μg/L堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)作為誘導(dǎo)劑,在體外進行誘導(dǎo)分化;然后實驗組加入TSP1,與對照組比較,觀察不同組之間突觸形成的情況;利用細胞免疫組化法顯示突觸后致密蛋白95(PSD-95)和突觸素1(Synapsin1)的表達,觀察各組細胞突觸結(jié)構(gòu)的形成情況;利用熒光染料FM1-43進行突觸小泡的染色,間接觀察分化后各組細胞突觸循環(huán)的效能。
[結(jié)果]
3、 BMSCs在體外進行擴增、傳代至第3代后,流式細胞儀檢測到BMSCs的重要表達標(biāo)志物CD90陽性細胞比率為99.1%;在含有bFGF、 EGF和B27的Neurobasal無血清培養(yǎng)基中能成功誘導(dǎo)分化為神經(jīng)元樣細胞;添加有TSP1的實驗組突觸的形態(tài)和數(shù)量較對照組更典型;免疫組織化學(xué)方法顯示誘導(dǎo)后的神經(jīng)元樣細胞PSD-95和Synapsin1陽性表達,實驗組表達量較對照組明顯;實驗組FM1-43陽性率較對照組高。
[結(jié)論]<
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