MTDH基因轉(zhuǎn)染對(duì)乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞株化療敏感性影響的研究.pdf

1、目的:乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤，發(fā)病率位居我國(guó)女性惡性腫瘤之首，且其發(fā)病率呈逐年上升的趨勢(shì)，已嚴(yán)重威脅著廣大女性的健康。研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌是一系列原癌基因激活、抑癌基因失活導(dǎo)致的結(jié)果，其侵襲和轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致患者死亡的主要原因。
　　MTDH又稱為L(zhǎng)YRIC，AEG-1和3D3，是2002年新發(fā)現(xiàn)的多功能原癌基因，在乳腺癌、食管癌、黑色素瘤、肝癌、卵巢癌、非小細(xì)胞肺癌、前列腺癌、惡性膠質(zhì)細(xì)胞瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤等多種惡性腫瘤中過表達(dá)，MTD

2、H的過表達(dá)與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展以及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[5-12]， MTDH基因擴(kuò)增可以顯著增加乳腺癌細(xì)胞的肺轉(zhuǎn)移以及縮短患者的生存時(shí)間，運(yùn)用siRNA敲除MTDH基因可以使乳腺癌細(xì)胞中MTDH的表達(dá)下降40％，同時(shí)乳腺癌患者的肺轉(zhuǎn)移的機(jī)率降低80％。此外，MTDH基因的表達(dá)增高能夠增強(qiáng)神經(jīng)母細(xì)胞瘤非錨定的生長(zhǎng)力，同時(shí)能夠使惡性腫瘤細(xì)胞侵襲能力有所增強(qiáng)，采用siRNA處理能夠使神經(jīng)母細(xì)胞瘤浸潤(rùn)能力明顯被抑制。MTDH能夠?qū)熕幬锂a(chǎn)生耐藥性，

3、抑制MTDH表達(dá)可以導(dǎo)致乳腺癌細(xì)胞針對(duì)化療藥物和應(yīng)激原的敏感性增強(qiáng)，而其高表達(dá)能夠?qū)е履[瘤細(xì)胞產(chǎn)生耐藥性。以往研究表明，MTDH在惡性腫瘤中表達(dá)增高的患者生存期比表達(dá)下降患者生存期顯著縮短，并且復(fù)發(fā)率較高，因此提示MTDH的表達(dá)高低能夠作為評(píng)估惡性腫瘤預(yù)后的一個(gè)重要生物學(xué)指標(biāo)。
　　目前的研究主要集中在MTDH的分子特征、作用及其機(jī)制上，但是關(guān)于MTDH基因轉(zhuǎn)染乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞前后對(duì)化療藥物敏感性的關(guān)系的研究比較少見

4、。本研究旨在測(cè)定MTDH基因轉(zhuǎn)染乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞前后乳腺癌細(xì)胞中MTDH的mRNA及蛋白表達(dá)水平以及轉(zhuǎn)染前后對(duì)化療藥物的敏感性，進(jìn)而判斷MTDH與藥物敏感性之間的關(guān)系，從而尋找一種可以對(duì)乳腺癌評(píng)估預(yù)后并指導(dǎo)治療的分子生物學(xué)指標(biāo)。
　　方法:將攜帶MTDH基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至DH5α大腸桿菌中進(jìn)行擴(kuò)增，并使用脂質(zhì)體法將攜帶高表達(dá)MTDH基因的質(zhì)粒成功轉(zhuǎn)染到乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞（前期試驗(yàn)已經(jīng)證明此細(xì)胞中MTDH基因

5、最低表達(dá)）中，通過realtime PCR，Western Blot方法測(cè)定轉(zhuǎn)染前后MTDH的mRNA及蛋白表達(dá)水平，鑒定轉(zhuǎn)染效果。轉(zhuǎn)染成功后通過MTT法檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞對(duì)1mg/L的阿霉素及8mg/L（兩個(gè)濃度均為前期試驗(yàn)證實(shí)過的）的紫杉醇在24h時(shí)的藥物敏感性，同時(shí)通過流式細(xì)胞技術(shù)測(cè)定轉(zhuǎn)染前后阿霉素、紫杉醇誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，進(jìn)一步驗(yàn)證MTDH與阿霉素、紫杉醇藥物敏感性之間的關(guān)系。以SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析

6、轉(zhuǎn)染前后乳腺癌細(xì)胞的MTDH表達(dá)水平及與藥物敏感性是否存在差異。
　　結(jié)果:
　　1轉(zhuǎn)染前后人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231中MTDH mRNA、蛋白表達(dá)水平的檢測(cè)
　　通過realtime PCR、Western Blot法檢測(cè)轉(zhuǎn)染0.8ugMTDH基因48小時(shí)后乳腺癌細(xì)胞中MTDH基因、蛋白表達(dá)水平，轉(zhuǎn)染前后乳腺癌細(xì)胞中mRNA的表達(dá)水平分別為1.00±0.00、3.25±0.02，轉(zhuǎn)染前后乳腺癌細(xì)胞中MTDH的蛋

7、白表達(dá)水平分別為0.48±0.07、1.27±0.08，統(tǒng)計(jì)分析后顯示，轉(zhuǎn)染前后乳腺癌細(xì)胞中的MTDH基因、蛋白表達(dá)均有差異，兩組之間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　2轉(zhuǎn)染前后人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231對(duì)阿霉素藥物敏感性的檢測(cè)
　　通過MTT法檢測(cè)1mg/L的阿霉素在24h時(shí)對(duì)轉(zhuǎn)染前后乳腺癌細(xì)胞的抑制率:1mg/L的阿霉素在24h時(shí)對(duì)轉(zhuǎn)染前后乳腺癌細(xì)胞的抑制率分別為60.72±0.01％、41.68±0.03

8、％。通過流式細(xì)胞法檢測(cè)1mg/L的阿霉素在24h時(shí)對(duì)轉(zhuǎn)染前后乳腺癌細(xì)胞的凋亡率:1mg/L的阿霉素在24h時(shí)對(duì)轉(zhuǎn)染前后乳腺癌細(xì)胞的凋亡率分別為39.76±0.44％、20.59±0.59％，統(tǒng)計(jì)分析后顯示阿霉素對(duì)轉(zhuǎn)染前后乳腺癌細(xì)胞的抑制率、凋亡率均有差異，兩組之間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　3轉(zhuǎn)染前后人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231對(duì)紫杉醇藥物敏感性的檢測(cè)
　　通過MTT法檢測(cè)8mg/L的紫杉醇在24h時(shí)對(duì)轉(zhuǎn)染

9、前后乳腺癌細(xì)胞的抑制率:8mg/L的紫杉醇在24h時(shí)對(duì)轉(zhuǎn)染前后乳腺癌細(xì)胞的抑制率分別為58±0.38％、40.52±0.03％。通過流式細(xì)胞法檢測(cè)8mg/L的紫杉醇在24h時(shí)對(duì)轉(zhuǎn)染前后乳腺癌細(xì)胞的凋亡率:8mg/L的紫杉醇在24h時(shí)對(duì)轉(zhuǎn)染前后乳腺癌細(xì)胞的凋亡率分別為24.88±0.37％、13.97±0.50％，統(tǒng)計(jì)分析后顯示紫杉醇對(duì)轉(zhuǎn)染前后乳腺癌細(xì)胞的抑制率、凋亡率均有差異，兩組之間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論