沉默乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞MTDH基因?qū)β闶笠浦擦鲈鲋侈D(zhuǎn)移的抑制作用.pdf

1、目的：探討乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞MTDH基因沉默對(duì)裸鼠移植瘤增殖轉(zhuǎn)移的抑制作用及其機(jī)制。
　　方法：選擇 SPF級(jí)雌性裸小鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，腫瘤造模所用的細(xì)胞株有乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞株，MTDH基因沉默了的MDA-MB-231/P細(xì)胞株，空載體轉(zhuǎn)染的MDA-MB-231/P0細(xì)胞株。把15只裸鼠隨機(jī)分為腫瘤組（乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞株）、實(shí)驗(yàn)組（MDA-MB-231/P細(xì)胞株）和對(duì)照組(MDA-MB-231/

2、P0細(xì)胞株)三組。分別把三種不同細(xì)胞株注射到裸鼠右側(cè)胸壁第二對(duì)乳腺下。第三周開(kāi)始每三天測(cè)瘤體的長(zhǎng)短徑，了解瘤體體積變化。第八周處死裸鼠，切取腫瘤稱重。取裸鼠體表腫瘤、腋窩淋巴結(jié)和肺部組織行病理學(xué)檢查。RT-PCR檢測(cè)裸鼠體表瘤體中MTDH mRNA的表達(dá)，Weston-blot檢測(cè)瘤體細(xì)胞MTDH蛋白的表達(dá)，免疫組織化學(xué)檢測(cè)裸鼠腫瘤中MTDH蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.在相同的飼養(yǎng)條件下，實(shí)驗(yàn)組裸鼠與腫瘤組和對(duì)照組相比較

3、，同時(shí)間點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)組腫瘤體積明顯較小，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），而腫瘤組與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異（P>0.05）。從各組裸鼠腫瘤生長(zhǎng)曲線可以看出實(shí)驗(yàn)組腫瘤明顯比另外兩組生長(zhǎng)緩慢，而腫瘤組和對(duì)照組在腫瘤生長(zhǎng)速度上無(wú)明顯差別。
　　2.腫瘤重量：實(shí)驗(yàn)組與腫瘤組和對(duì)照組相比較，第八周處死裸鼠時(shí)實(shí)驗(yàn)組腫瘤重量明顯減輕，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），而腫瘤組與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異（P>0.05）。
　　3.體表腫瘤的病理結(jié)

4、果顯示，三組之間腫瘤細(xì)胞排列和生長(zhǎng)方式以及腫瘤血管生長(zhǎng)沒(méi)有明顯差別。
　　4.腋窩淋巴結(jié)：HE染色后鏡檢，腫瘤組內(nèi)5組腋窩淋巴結(jié)標(biāo)本，18個(gè)淋巴結(jié)標(biāo)本中10個(gè)轉(zhuǎn)移，對(duì)照組16個(gè)淋巴結(jié)標(biāo)本中8個(gè)轉(zhuǎn)移，實(shí)驗(yàn)組18個(gè)淋巴結(jié)中2個(gè)轉(zhuǎn)移。腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率分別為：56％、50％和11％，實(shí)驗(yàn)組轉(zhuǎn)移率明顯低于腫瘤組和對(duì)照組（P<0.01），而對(duì)照組與腫瘤組陽(yáng)性率比較無(wú)差別（P>0.05）。
　　5.肺部組織HE染色后，腫瘤組內(nèi)的5個(gè)肺標(biāo)本

5、中轉(zhuǎn)移陽(yáng)性的有1個(gè)，對(duì)照組2個(gè)為陽(yáng)性，實(shí)驗(yàn)組標(biāo)本轉(zhuǎn)移陽(yáng)性的有0個(gè)。
　　6.應(yīng)用RT-PCR分析了接種的三組裸鼠體表瘤體組織的MTDH mRNA的表達(dá)。與腫瘤組和對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組瘤體組織的MTDH mRNA表達(dá)水平下降，差異有顯著意義（P<0.01），腫瘤組與對(duì)照組相比差異無(wú)顯著性（P>0.05）。
　　7.Western blot法檢測(cè)三組裸鼠瘤體組織中的MTDH蛋白表達(dá)量，與腫瘤組和對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組瘤體組織中的MTD

6、H蛋白表達(dá)水平明顯下降（P<0.01），腫瘤組與對(duì)照組MTDH蛋白表達(dá)水平相比無(wú)顯著差異（P>0.05）。
　　8.體表腫瘤的免疫組化：結(jié)果按照評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)，腫瘤組內(nèi)的5個(gè)標(biāo)本的25個(gè)視野有18個(gè)為陽(yáng)性，對(duì)照組有17個(gè)，實(shí)驗(yàn)組有4個(gè)為陽(yáng)性，其平均陽(yáng)性率分別為：72％、68％和16％。與腫瘤組和對(duì)照組比較，實(shí)驗(yàn)組MTDH蛋白表達(dá)陽(yáng)性率明顯降低（P<0.01），而對(duì)照組與腫瘤組MTDH蛋白表達(dá)陽(yáng)性率無(wú)差別（P>0.05）。